Luận án: Interaction of the general transcription factor TnrA with the PII-like protein GlnK and glutamine synthetase in Bacillus subtilis

Interaction Of The General Transcription Factor TnrA With The PII-Like Protein Glnk And Glutamine Synthetase In Bacillus Subtilis

Tác giả: Airat Kayumov, Annette Heinrich, Kseniya Fedorova, Olga Ilinskaya and Karl Forchhammer

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Vi sinh vật học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá sự tương tác của yếu tố phiên mã TnrA với protein GlnK và enzyme glutamine synthetase (GS) trong vi khuẩn Bacillus subtilis. TnrA là một yếu tố phiên mã chính điều hòa quá trình chuyển hóa nitơ, đặc biệt trong điều kiện thiếu nitơ. Nghiên cứu đã làm rõ cơ chế mà TnrA liên kết với GlnK và GS, và cách các tương tác này ảnh hưởng đến sự ổn định và hoạt động của TnrA, đặc biệt là bảo vệ TnrA khỏi sự phân hủy bởi protease. Các thí nghiệm sử dụng nhiều phương pháp như miễn dịch kết tủa, SPR, ITC và phân tích protein biến đổi cho thấy TnrA có thể tạo thành phức hợp ổn định với cả GlnK và GS, và sự tương tác này bị ảnh hưởng bởi các nucleotide adenylate như ATP. Cụ thể, TnrA tương tác với GlnK trong điều kiện AmtB-thiếu hụt, và với GS trong điều kiện GlnK-thiếu hụt, mang lại sự bảo vệ khỏi sự phân hủy TnrA.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Immunoprecipitation of TnrA with Glnk or GS in B. subtilis
• Surface plasmon resonance analysis (SPR) of the Glnk-TnrA interaction
• Isothermal titration calorimetry (ITC)
• BIAcore analysis of the GS-TnrA interaction
• The C-terminus of TnrA is required for interaction with both Gink and GS, as well as for intracellular proteolysis
• Discussion
• Experimental procedures
• Bacterial strains and growth conditions
• Protein preparation
• Immunoblot analysis
• Coupling antibodies to Protein A Sepharose
• Immunoprecipitation
• BIAcore SPR detection
• ITC
• Construction of mutant tnrA genes
• Pulldown
• Acknowledgements
• References
• Supporting information