Discriminating Between The Activities Of Human Cathepsin G And Chymase Using Fluorogenic Substrates

Tác giả: Brice Korkmaz, Gwenhael Jégot, Laurie C. Lau, Michael Thorpe, Elodie Pitois, Luiz Juliano, Andrew F. Walls, Lars Hellman and Francis Gauthier

Lĩnh vực: Proteases et Vectorisation pulmonaires, Immunopharmacology Group, Department of Cell and Molecular Biology, Departamento de Biofísica.

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc phân biệt hoạt động của cathepsin G (CG) và chymase, hai enzyme serine protease thuộc nhóm chymotrypsin có quan hệ gần gũi. Các enzyme này có vai trò trong các phản ứng viêm nhiễm liên quan đến tế bào bạch cầu trung tính và tế bào mast. Mặc dù có sự tương đồng cao về trình tự và đặc tính nhận diện cơ chất, nhưng sự khác biệt cấu trúc tinh tế, đặc biệt là ở vị trí S2′ của túi liên kết cơ chất, cho phép phân biệt hoạt động của hai enzyme này. Các nhà nghiên cứu đã thiết kế và tối ưu hóa các cơ chất huỳnh quang FRET để tăng cường độ nhạy và đặc hiệu cho CG, cho phép định lượng CG ngay cả khi có sự hiện diện của chymase và các protease khác. Nghiên cứu đã chứng minh khả năng ứng dụng của cơ chất mới trong việc phân tích hoạt động CG trong các mẫu tế bào và mô, mở ra tiềm năng phát triển các chất ức chế chọn lọc cho các bệnh lý liên quan.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results and Discussion
• S1′ specificity of CG and chymase
• S2′ specificity of CG and chymase
• Design of specific and sensitive substrates for CG and chymase
• Measurement of CG activity in a mast cell line extract and in sputum
• Materials and methods
• Design and synthesis of quenched fluorescent substrates
• Enzyme assays
• Chromatographic procedures and analysis of peptide products
• Nomenclature
• Acknowledgements
• References