Dự án tóm tắt Luận án Tiến sĩ Sinh học: Nghiên cứu hiện tượng methyl hóa ở gen GSTP1 liên quan ung thư tuyến tiền liệt ở bệnh nhân Việt Nam

Nghiên cứu hiện tượng methyl hóa ở gen GSTP1 liên quan đến ung thư tuyến tiền liệt ở bệnh nhân Việt Nam

Tác giả: Vương Diệu Linh

Lĩnh vực: Di truyền học

Nội dung tài liệu:

Công trình nghiên cứu tập trung vào hiện tượng methyl hóa DNA, một yếu tố ngoại di truyền có vai trò quan trọng trong việc điều hòa hoạt động gen và liên quan mật thiết đến sự phát triển của ung thư. Cụ thể, đề tài khảo sát sự methyl hóa của gen GSTP1, một gen mã hóa enzyme tham gia vào quá trình khử độc, trong mối liên hệ với ung thư tuyến tiền liệt (UTTTL) ở bệnh nhân Việt Nam. Nghiên cứu này nhằm phân tích mức độ methyl hóa promoter GSTP1 ở bệnh nhân UTTTL, xác định mối tương quan giữa mức độ methyl hóa này với các đặc điểm mô bệnh học, từ đó góp phần hoàn thiện kỹ thuật phát hiện methyl hóa, làm tiền đề phát triển bộ sinh phẩm hỗ trợ chẩn đoán sớm và tiên lượng UTTTL. Nghiên cứu cũng đề cập đến các phương pháp phân tích methyl hóa DNA như MS-PCR và những đóng góp của đề tài trong việc tối ưu hóa quy trình, xác định tỷ lệ methyl hóa GSTP1 ở bệnh nhân Việt Nam.

Mục lục chi tiết:

• Chương 1: Tổng quan
• 1.1. Ung thư
• 1.1.1. Thực trạng ung thư
• 1.1.2. Cơ sở tế bào học ung thư
• 1.1.3. Di truyền học ung thư
• 1.2. Di truyền ngoại gen và ung thư
• 1.2.1. Biến đổi histone trong ung thư
• 1.2.2. Methyl hóa DNA bất thường trong ung thư
• 1.3. Methyl hóa DNA trong UTTTL
• 1.3.1. Phân độ trong ung thư tuyến tiền liệt
• 1.3.2. Methyl hóa DNA trong ung thư tuyến tiền liệt
• 1.4. Phương pháp phân tích methyl hóa DNA
• 1.4.1. Phương pháp COBRA
• 1.4.2. Phương pháp PCR đặc hiệu methyl MS-PCR
• 1.4.3. Phương pháp định lượng qMS-PCR
• 1.5. Dấu chuẩn sinh học hỗ trợ chẩn đoán, tiên lượng ung thư
• 1.5.1. Dấu chuẩn sinh học sử dụng cho ung thư
• 1.5.2. Dấu chuẩn sinh học sử dụng cho ung thư tuyến tiền liệt
• 1.5.3. Triển vọng các bộ kit sử dụng dấu chuẩn methyl hóa DNA
• 1.6. Nghiên cứu methyl hóa DNA trong ung thư ở Việt Nam
• Chương 2: Vật liệu và Phương pháp nghiên cứu
• 2.1. Nguyên liệu
• 2.2. Thiết bị chính
• 2.3. Phương pháp nghiên cứu
• Chuẩn bị mẫu để tách chiết DNA
• Nuôi cấy dòng tế bào ung thư tuyến tiền liệt PC3
• Tách chiết DNA tổng số
• Xử lý DNA tổng số với bisulfite
• Tách dòng
• Phương pháp PCR
• Phương pháp lai điểm
• Phương pháp điện di
• Xác định nồng độ DNA bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ
• Tinh sạch sản phẩm PCR
• Thiết kế mồi đặc hiệu cho phản ứng MS-PCR
• Xử lý kết quả bằng thống kê sinh học
• Xác định số bản copy
• 2.4. Sơ đồ thí nghiệm
• Chương 3: Kết quả và Thảo luận
• 3.1. Thu thập và phân loại mẫu
• 3.2. Tách chiết DNA tổng số
• 3.2.1. Tách chiết DNA từ mẫu máu và dòng tế bào nuôi cấy PC3
• 3.2.2. Tách chiết DNA từ mẫu bệnh phẩm đúc paraffin
• 3.3. Xử lý DNA tổng số với bisulfite
• 3.3.1. Đánh giá chất lượng DNA sau xử lý bisulfite
• 3.3.2. Xử lý DNA tổng số của các mẫu bệnh phẩm với bisulfite
• 3.4. Tối ưu phản ứng MS-PCR để phát hiện methyl hóa promoter gen GSTP1
• 3.5. Kiểm tra sản phẩm MS-PCR đặc hiệu cho GSTPI bị methyl hóa
• 3.5.1. Kiểm tra sản phẩm đặc hiệu bằng phản ứng cắt với enzym giới hạn
• 3.5.2. Kiểm tra sản phẩm MS-PCR đặc hiệu bằng giải trình tự