Luận án Tiến sĩ Hoá học: Phân lập toxin có hoạt tính chống đông máu từ nọc bò cạp Heterometrus laoticus và Toxin có hoạt tính giảm đau, kháng tăng sinh tế bào ung thư từ nọc rắn Bungarus fasciatus

Phân lập toxin có hoạt tính chống đông máu từ nọc bò cạp Heterometrus laoticus và toxin có hoạt tính giảm đau, kháng tăng sinh tế bào ung thư từ nọc rắn Bungarus fasciatus

Tác giả: Trần Vũ Thiên

Lĩnh vực: Hóa học

Nội dung tài liệu:

Luận án này tập trung vào việc phân lập và xác định cấu trúc của các toxin từ nọc bò cạp Heterometrus laoticus và nọc rắn Bungarus fasciatus. Nghiên cứu nhằm mục đích tìm kiếm các ứng dụng tiềm năng trong y dược của các hợp chất này. Cụ thể, luận án tập trung vào phân lập các toxin có hoạt tính chống đông máu từ nọc bò cạp Heterometrus laoticus, và các toxin có hoạt tính giảm đau, kháng tăng sinh tế bào ung thư từ nọc rắn Bungarus fasciatus. Đề tài này có ý nghĩa khoa học và thực tiễn cao, góp phần làm phong phú thêm kiến thức về thành phần và hoạt tính sinh học của nọc độc động vật tại Việt Nam.

Mục lục chi tiết:

• Lời cam đoan
• Lời cảm ơn
• Mục lục
• Danh mục các ký hiệu, các chữ viết tắt
• Danh mục các bảng
• Danh mục các hình vẽ, đồ thị
• MỞ ĐẦU
• CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN
• 1.1. Giới thiệu về bò cạp
• Phân bố địa lý
• 1.2. Giới thiệu chung về rắn
• 1.2.1. Giới thiệu về rắn cạp nong
• 1.2.2. Phân bố sinh thái
• 1.3. Tình hình nghiên cứu về nọc bò cạp
• 1.3.1. Tình hình nghiên cứu nọc bò cạp trên thế giới
• 1.3.2. Tình hình nghiên cứu bò cạp ở Việt Nam
• 1.4. Tình hình nghiên cứu về nọc rắn
• 1.4.1. Tình hình nghiên cứu về nọc rắn trên thế giới
• 1.4.2. Những nghiên cứu về rắn cạp nong ở Việt Nam
• CHƯƠNG 2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM
• 2.1. Đối tượng nghiên cứu
• 2.1.1. Khảo sát và phân lập các chất có hoạt tính chống đông máu từ nọc bò cạp H. laoticus
• 2.1.2. Khảo sát và phân lập các chất có hoạt tính giảm đau, kháng tăng sinh tế bào ung thư từ nọc rắn cạp nong B. fasciatus
• 2.2. Thiết bị nghiên cứu
• 2.3. Phương pháp phân lập và xác định các toxin từ nọc bò cạp H. laoticus
• 2.3.1. Sơ đồ tách, làm sạch và xác định toxin từ nọc bò cạp H. laoticus
• 2.3.2. Tách protein trong nọc bò cạp H. laoticus bằng sắc ký lọc gel trên cột với Sephadex G-50
• 2.3.3. Phân tách phân đoạn 5 nọc bò cạp H. laoticus bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao pha đảo (RP-HPLC)
• 2.3.4. Khảo sát tác động của các phân đoạn thứ cấp của phân đoạn 5 nọc bò cạp H. laoticus lên quá trình đông – chảy máu
• 2.3.5. Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất có hoạt tính chống đông máu
• 2.4. Phương pháp phân lập và xác định các toxin từ nọc rắn cạp nong B. fasciatus
• 2.4.1. Sơ đồ tách, làm sạch và xác định toxin từ nọc rắn cạp nong B. fasciatus
• 2.4.2. Tách protein trong nọc rắn cạp nong B. fasciatus bằng sắc ký lọc gel trên gel Superdex HR75
• 2.4.3. Khảo sát KLPT các phân đoạn tách từ nọc rắn cạp nong B. fasciatus bằng phương pháp điện di
• 2.4.4. Khảo sát tác dụng giảm đau
• 2.4.4.1. Khảo sát tác dụng giảm đau ngoại biên của nọc rắn cạp nong B. fasciatus toàn phần và các phân đoạn
• 2.4.4.2. Khảo sát tác dụng giảm đau trung ương của nọc răn cạp nong B. fasciatus toàn phần và các phân đoạn
• 2.4.5. Tách các phân đoạn thứ cấp của phân đoạn BF4 nọc rắn cạp nong B. fasciatus bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao pha đảo (RP-HPLC)
• 2.4.6. Khảo sát hoạt tính giảm đau của một số phân đoạn thứ cấp tách ra từ phân đoạn BF4
• 2.4.7. Phân tích thống kê kết quả thử hoạt tính giảm đau
• 2.4.8. Phương pháp xác định KLPT của protein có hoạt tính giảm đau
• 2.4.9. Khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thư của nọc thô và các phân đoạn rắn cạp nong B. fasciatus theo phương pháp MTT
• 2.4.10. Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào
• 2.4.10.1. Xác định KLPT dựa trên MALDI TOF/TOF MS
• 2.4.10.2. Xác định trình tự amino acid dựa trên LC-MS/MS
• CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BIỆN LUẬN
• 3.1. Kết quả về bò cạp H. laoticus
• 3.1.1. Sắc ký lọc gel nọc bò cạp H. laoticus
• 3.1.2. Tách phân đoạn 5 nọc bò cạp H. laoticus bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao pha đảo (RP-HPLC)
• 3.1.3. Tác động của các phân đoạn thứ cấp của phân đoạn 5 nọc bò cạp H. laoticus lên quá trình đông – chảy máu
• 3.1.4. Làm sạch hợp chất có hoạt tính chống đông máu từ phân đoạn 5.5 và 5.22
• 3.1.4.1. Làm sạch phân đoạn 5.5
• 3.1.4.2. Làm sạch phân đoạn 5.22
• 3.1.5. Hoạt tính chống đông máu của phân đoạn 5 và các hợp chất sạch: 5.5.1, 5.22.3, 5.21.1 (dipeptide Leu – Trp)
• 3.1.6. Xác định cấu trúc các chất có hoạt tính chống đông máu (5.5.1 và 5.22.3) từ phân đoạn 5.5 và 5.22 bằng MS và NMR
• 3.1.6.1. Cấu trúc của toxin 5.5.1
• 3.1.6.2. Cấu trúc của toxin 5.22.3
• 3.2. Kết quả về rắn cạp nong B. fasciatus
• 3.2.1. Sắc ký lọc gel của nọc rắn cạp nong B. fasciatus
• 3.2.2. Xác định KLPT của các phân đoạn tách từ nọc rắn cạp nong B. fasciatus bằng phương pháp điện di
• 3.2.3. Tác dụng giảm đau ngoại biên của nọc rắn cạp nong B. fasciatus toàn phần và các phân đoạn
• 3.2.4. Tác dụng giảm đau trung ương của nọc rắn cạp nong B. fasciatus toàn phần và các phân đoạn
• 3.2.5. Phân tách phân đoạn BF4 từ nọc rắn cạp nong B. fasciatus có hoạt tính giảm đau bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (RP-HPLC)
• 3.2.6. Hoạt tính giảm đau của một số phân đoạn thứ cấp của phân đoạn BF4
• 3.2.6.1. Giảm đau ngoại biên
• 3.2.6.2. Giảm đau trung ương
• 3.2.7. Xác định KLPT của protein BF4.11 và protein BF4.12 có hoạt tính giảm đau
• 3.2.8. Hoạt tính gây độc tế bào ung thư của nọc rắn cạp nong B. fasciatus
• 3.2.8.1. Khả năng gây độc tế bào ung thư vú MCF-7 của nọc thô (BF) và các phân đoạn (BF1 – BF5)
• 3.2.8.2. Khả năng gây độc tế bào ung thư phổi A549 của nọc thô (BF) và các phân đoạn (BF1 – BF5)
• 3.2.9. Phân lập phân đoạn BF3 bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (RP-HPLC)
• 3.2.10. Hoạt tính gây độc tế bào ung thư vú MCF-7 và ung thư phổi A549 của các phân đoạn thứ cấp (BF3.1, BF3.2, BF3.3, BF3.4) từ phân đoạn BF3
• 3.2.10.1. Khả năng gây độc tế bào ung thư vú MCF-7 của các phân đoạn thứ cấp (BF3.1, BF3.2, BF3.3, BF3.4)
• 3.2.10.2. Khả năng gây độc tế bào ung thư phổi A549 của các phân đoạn thứ cấp (BF3.1, BF3.2, BF3.3, BF3.4)
• 3.2.11. Khả năng gây độc tế bào thường HK2 ở người của nọc thô (BF), các phân đoạn (BF1 – BF5) và các phân đoạn thứ cấp (BF3.1, BF3.2, BF3.3, BF3.4)
• 3.2.12. Xác định cấu trúc bậc một (trình tự amino acid) của protein 3.3 có hoạt tính gây độc tế bào ung thư vú MCF-7 và ung thư phổi A549
• 3.2.12.1. Xác định KLPT của BF3.3 dựa trên MALDI TOF/TOF MS
• 3.2.12.2. Xác định trình tự amino acid của protein 3.3 dựa trên LC-MS/MS
• KẾT LUẬN
• KIẾN NGHỊ
• DANH MỤC CÁC BÀI BÁO ĐÃ XUẤT BẢN
• TÀI LIỆU THAM KHẢO
• PHỤ LỤC