A novel vector platform for vitamin H-inducible transgene expression in mammalian cells

A Novel Vector Platform for Vitamin H-Inducible Transgene Expression in Mammalian Cells

Tác giả: Wilfried Weber, William Bacchus, Franziska Gruber, Mattia Hamberger, Martin Fussenegger

Lĩnh vực: Khoa học sinh học, Kỹ thuật hóa học và Tin sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này giới thiệu một nền tảng vector mới cho phép điều khiển biểu hiện gen cảm ứng bởi vitamin H (biotin) trong các tế bào động vật có vú. Hệ thống này chuyển đổi các hệ thống điều hòa gen phản ứng với kháng sinh thành các hệ thống phản ứng với biotin, một loại vitamin không độc hại. Bằng cách kết hợp các yếu tố điều hòa gen phản ứng với kháng sinh (tetracycline, streptogramin, macrolide) với công nghệ phản ứng với biotin, các nhà nghiên cứu đã phát triển các bộ điều khiển gen mới có thể điều chỉnh được bằng biotin. Hệ thống này cho phép biểu hiện gen có thể kiểm soát được trong môi trường có chứa biotin tự nhiên và có thể được điều chỉnh để tối ưu hóa việc sản xuất protein dược phẩm khó sản xuất hoặc cho các ứng dụng liệu pháp gen trong tương lai.

Mục lục chi tiết:

• 1. Introduction
• 2. Material and methods
• 2.1. Vector design and construction
• 2.2. Cell culture
• 2.3. Transfection of CHO-K1
• 2.4. Transduction technologies
• 2.5. Quantification of reporter gene expression
• 2.6. Regulating agents
• 3. Results and discussion
• 3.1. Conversion of antibiotic-responsive promoters into vitamin H-inducible expression units
• 3.2. Design of compact expression vectors for biotin-responsive transgene expression
• 3.3. Biotin-responsive gene expression in biotin-containing environments
• 3.4. Transgenic lentiviral particles for transduction of biotin-inducible gene expression
• 4. Conclusions