Báo cáo Y học: Secretion of a peripheral membrane protein, MFG-E8, as a complex with membrane vesicles A possible role in membrane secretion

Secretion Of A Peripheral Membrane Protein, MFG-E8, As A Complex With Membrane Vesicles

Tác giả: Kenji Oshima, Naohito Aoki, Takeo Kato, Ken Kitajima, Tsukasa Matsuda

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Tế bào học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc làm rõ cơ chế tiết protein MFG-E8, một glycoprotein ngoại vi, dưới dạng phức hợp với các túi màng. Các thí nghiệm đã sử dụng tế bào COS-7 và dòng tế bào biểu mô tuyến vú chuột để biểu hiện MFG-E8 và các biến thể của nó. Kết quả cho thấy cả hai miền C (C1 và C2) của MFG-E8 đều cần thiết cho sự gắn kết với màng tế bào. Đặc biệt, MFG-E8, không giống như các biến thể thiếu miền C, được tiết ra dưới dạng phức hợp với các túi màng có khối lượng phân tử cao, mật độ thấp và nhạy cảm với chất tẩy. Các phân tích kính hiển vi điện tử quét cho thấy MFG-E8 được tiết ra cùng với các túi màng nhỏ có đường kính từ 100 đến 200 nm. Nghiên cứu đề xuất rằng MFG-E8 có thể đóng vai trò trong quá trình tiết túi màng, bao gồm cả sự nảy chồi hoặc bong ra của màng plasma (vi túi màng) và xuất bào của các thể đa nang nội bào (exosomes).

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Quy trình thực nghiệm
• Nuôi cấy tế bào
• Xây dựng các plasmid biểu hiện và chuyển gen
• Nhuộm miễn dịch huỳnh quang
• Điện di SDS/PAGE và Western blot
• Gắn biotin bề mặt tế bào
• Sắc ký loại trừ kích thước của MFG-E8 được tiết ra
• Siêu ly tâm
• Siêu ly tâm gradient mật độ sucrose
• Phân tích liên kết phospholipid bằng ELISA
• Kính hiển vi điện tử quét
• Phân bố tế bào và ngoại bào của MFG-E8 và các đột biến mất miền của nó được biểu hiện trong tế bào COS-7
• MFG-E8, không phải là các đột biến thiếu miền C, được tiết ra như một thành phần của các phức hợp có khối lượng phân tử cao và gắn với phosphatidylserine
• Các phức hợp có khối lượng phân tử cao chứa MFG-E8 là các túi màng có nguồn gốc từ màng
• Thảo luận
• Lời cảm ơn
• Tài liệu tham khảo