Báo cáo Y học: Purification and characterization of the thyrotropin-releasing hormone (TRH)-degrading serum enzyme and its identification as a product of liver origin

Purification and characterization of the thyrotropin-releasing hormone (TRH)-degrading serum enzyme and its identification as a product of liver origin

Tác giả: Stephanie Schmitmeier, Hubert Thole, Augustinus Bader, and Karl Bauer

Lĩnh vực: Biochemistry, Endocrinology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc làm sáng tỏ bản chất và nguồn gốc của enzyme phân hủy hormone giải phóng thyrotropin (TRH-DE) trong huyết thanh. Các kết quả cho thấy enzyme huyết thanh và enzyme gan có mối quan hệ chặt chẽ, cùng với các bằng chứng mạnh mẽ ủng hộ giả thuyết rằng enzyme huyết thanh là sản phẩm của gan. Nghiên cứu đã thực hiện việc tinh sạch enzyme từ huyết thanh và gan, phân tích cấu trúc, đặc điểm sinh hóa, và so sánh với enzyme TRH-DE từ não. Các phân tích về trình tự peptide và cấu trúc carbohydrate đã củng cố thêm giả thuyết rằng các enzyme TRH-DE này đều có nguồn gốc từ cùng một gen, với enzyme huyết thanh được tạo ra thông qua quá trình phân cắt enzyme của enzyme gan.

Mục lục chi tiết:

• MATERIALS AND METHODS
• Chemicals
• Animals
• Preparation of tissue homogenates and serum
• Induction of liver cirrhosis in rats
• Hepatocyte isolation and culture
• Protein and DNA analysis
• Determination of TRH-DE activity
• Purification of the TRH-DE from porcine serum
• Purification of the membrane-bound TRH-DE from porcine liver
• SDS/PAGE analysis
• Western blot analysis
• Lectin blot analysis
• Deglycosylation
• Enzyme fragmentation and peptide sequencing
• RESULTS
• Degradation of TRH by serum and tissue homogenates from different species
• Influence of thioacetamide, a hepatotoxin, on the activity of the serum TRH-DE
• Synthesis of the TRH-DE by hepatocytes in culture
• Purification of the TRH-DEs from serum and liver
• Characterization of the TRH-DEs from serum and liver
• Identification as glycoproteins
• Peptide sequences of the serum TRH-DE
• DISCUSSION
• ACKNOWLEDGEMENTS
• REFERENCES