Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: 257 KB

Giới thiệu nội dung

A Ca2+/CaM-dependent kinase from pea is stress regulated and in vitro phosphorylates a protein that binds to AtCaM5 promoter

Tác giả: Sona Pandey, Shiv B. Tiwari, Wricha Tyagi, Mali K. Reddy, Kailash C. Upadhyaya and Sudhir K. Sopory

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Sinh hóa thực vật

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của một enzyme kinase phụ thuộc Canxi/Calmodulin (Ca2+/CaM) ở thực vật đậu Hà Lan (PsCCaMK) trong phản ứng với các yếu tố gây stress, cụ thể là nhiệt độ thấp và độ mặn. Enzyme này được tìm thấy tăng cường hoạt động ở rễ cây khi đối mặt với các điều kiện stress này, và phản ứng này được thúc đẩy bởi Ca2+ ngoại sinh. Nghiên cứu cũng xác định một protein liên kết với promoter của gen AtCaM5 (p40) và cho thấy PsCCaMK có khả năng phosphoryl hóa p40. Phosphoryl hóa này ảnh hưởng đến khả năng liên kết của p40 với các yếu tố cis trong promoter AtCaM5, cho thấy một cơ chế điều hòa biểu hiện gen liên quan đến stress.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Experimental Procedures
  • Plant material, growth conditions and stress treatments
  • Protein extraction, SDS/PAGE and immunoblotting
  • Protein purification using immuno-affinity chromatography
  • In vitro phosphorylation assays
  • RT-PCR
  • Preparation of nuclear protein extract, heparin-agarose chromatography and gel mobility shift analysis
  • Results
  • Immuno-homologue of maize ZmCCaMK is upregulated by low temperature and salinity stresses in pea roots
  • Calcium upregulates the PsCCaMK level in a time- and concentration-dependent manner
  • Low temperature, but not salinity-stimulated kinase level is mediated via a Ca2+/CaM pathway
  • Purification of PsCCaMK by immuno-affinity chromatography: a 40-kDa protein always coelutes
  • PsCCaMK is present in nuclear protein extracts and possibly interacts with DNA
  • The 40-kDa protein is phosphorylated by PsCCaMK and binds directly with the AtCaM5 promoter
  • p40 binds to the specific cis-elements in the AtCaM5 promoter region and the binding is affected by phosphorylation
  • Discussion
  • Role of PsCCaMK in stress signaling
  • Purification of PsCCaMK and its substrate protein and their functional characterization
  • Proposed mechanism of action
  • Acknowledgements
  • References