Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 237 KB

Giới thiệu nội dung

Pressure and Heat Inactivation of Recombinant Human Acetylcholinesterase

Tác giả: Cécile Cléry-Barraud, Arie Ordentlich, Haim Grosfeld, Avigdor Shafferman, and Patrick Masson

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh hóa

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá sự bất hoạt của enzyme acetylcholinesterase tái tổ hợp ở người (rHuAChE) dưới tác động của áp suất và nhiệt độ. Các nhà nghiên cứu đã sử dụng phương pháp điện di gel dưới áp suất thủy tĩnh cao, đo huỳnh quang của ANS gắn kết và các phép đo hoạt tính sau khi tiếp xúc với áp suất cao. Nghiên cứu đã xem xét enzyme dạng hoang dã và ba dạng đột biến đơn lẻ (D74N, E202Q, E450A) cùng một dạng đột biến sáu lần (E84Q/E292A/D349N/E358Q/E389Q/D390N). Kết quả cho thấy áp suất có tác động khác biệt lên enzyme dạng hoang dã và các dạng đột biến, cho phép ước tính đóng góp của các chuỗi bên amino acid mang nhóm carboxyl vào sự ổn định của enzyme. Việc thay thế các gốc tích điện âm D74 và E202 bằng các chuỗi bên phân cực đã tăng cường độ ổn định nhiệt hoặc áp suất. Ngược lại, đột biến E450A và đột biến sáu lần đã làm giảm độ ổn định của enzyme đối với áp suất. Dữ liệu bất hoạt nhiệt của các dạng đột biến cho thấy tất cả chúng đều được ổn định hơn đối với nhiệt độ. Nghiên cứu kết luận rằng độ ổn định áp suất và nhiệt của các dạng đột biến đã cung cấp bằng chứng cho thấy gốc E202 là yếu tố quyết định sự ổn định cấu trúc và chức năng của HuAChE.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và Phương pháp
  • Hóa chất
  • Enzyme tái tổ hợp
  • Điện di dưới áp suất cao
  • Phân tích điện di của HuAChE dạng hoang dã và các dạng đột biến
  • Huỳnh quang ANS sau khi tiếp xúc với áp suất của AChE
  • Bất hoạt bất thuận nghịch do áp suất
  • Xác định Vin
  • Bất hoạt do áp suất
  • Bất hoạt nhiệt
  • So sánh độ ổn định áp suất và nhiệt
  • Kết luận
  • Tài liệu tham khảo