Báo cáo Y học: Diffusion through channel derivatives of the Escherichia coli FhuA transport protein

Diffusion through channel derivatives of the Escherichia coli FhuA transport protein

Tên đề tài: Diffusion through channel derivatives of the Escherichia coli FhuA transport protein

Tác giả: Michael Braun, Helmut Killmann, Elke Maier, Roland Benz, and Volkmar Braun

Lĩnh vực: Microbiology/Membrane Physiology, University of Tübingen, Germany; Biotechnology, Theodor-Boveri-Institut (Biozentrum), University of Würzburg, Germany.

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào protein FhuA trong màng ngoài của Escherichia coli, một protein đa chức năng có vai trò vận chuyển tích cực các hợp chất như [Fe3+]ferrichrome, các kháng sinh albomycin và rifamycin CGP 4832, cũng như đóng vai trò thụ thể cho các phage T5, T1, $80, phage UC-1, colicin M và microcin J25. Nghiên cứu đã phân tích các dẫn xuất kênh của FhuA, bao gồm cả việc loại bỏ miền N-terminal hình cầu và các vòng bề mặt, để hiểu rõ hơn về cấu trúc và chức năng của protein này. Các thí nghiệm đã được thực hiện để đo lường độ dẫn kênh đơn lẻ trong màng lipid nhân tạo và đánh giá sự nhạy cảm của tế bào đối với các tác nhân khác nhau. Kết quả cho thấy sự khác biệt về cấu trúc kênh dẫn đến sự thay đổi trong khả năng vận chuyển và tính thấm của màng.

Mục lục chi tiết:

• Diffusion through channel derivatives of the Escherichia coli FhuA transport protein
• Materials and Methods
• Bacterial strains, plasmids and growth conditions
• Recombinant DNA techniques
• Protein analytical methods
• Phenotype assays
• Ferrichrome uptake assays
• Ferrichrome binding assay
• Purification of the FhuA proteins
• Black lipid bilayer membrane experiments
• Results
• FhuA5-160 does not form stable channels in lipid bilayers
• FhuA5-160 Δ322–336 increased the permeability of lipid bilayer membranes
• FhuA5-160 Δ335–355 forms stable channels
• Single-channel analysis of the FhuA deletion mutants
• Active transport of ferrichrome by FhuA deletion derivatives
• Increase of outer membrane permeability by the FhuA deletion derivatives
• Growth of FhuA deletion mutants on maltodextrins
• FhuA activities of the FhuA deletion mutants
• Discussion
• Acknowledgements
• References