Báo cáo Y học: Barley a-amylase Met53 situated at the high-affinity subsite )2 belongs to a substrate binding motif in the bfia loop 2 of the catalytic (b/a)8-barrel and is critical for activity and substrate specificity

Barley α-amylase Met53 situated at the high-affinity subsite –2 belongs to a substrate binding motif in the β→α loop 2 of the catalytic (β/α)8-barrel and is critical for activity and substrate specificity

Tác giả: Haruhide Mori*, Kristian Sass Bak-Jensen and Birte Svensson

Lĩnh vực: Biochemistry, Enzymology, Molecular Biology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào vai trò của axit amin Met53 trong enzyme α-amylase 1 (AMY1) của lúa mạch, đặc biệt là vị trí của nó tại ái lực cao của ái lực phụ -2. Met53 được xác định là duy nhất đối với các enzyme α-amylase thực vật và là một phần của một motif gắn kết cơ chất trong vùng β→α loop 2 của cấu trúc (β/α)8-barrel của enzyme. Thông qua các đột biến có định hướng, các nhà nghiên cứu đã điều tra ảnh hưởng của việc thay thế Met53 đối với hoạt tính và đặc hiệu của enzyme. Kết quả cho thấy Met53 đóng vai trò quan trọng trong việc xác định hoạt tính và đặc hiệu của enzyme đối với các cơ chất khác nhau, bao gồm cả tinh bột không hòa tan, amylose DP17 và các oligosaccharide. Sự thay thế Met53 bằng các axit amin khác nhau đã dẫn đến những thay đổi đáng kể về hiệu quả xúc tác (kcat/Km), ái lực gắn kết (Km) và mô hình cắt liên kết của enzyme. Nghiên cứu cũng đề xuất rằng Met53 ảnh hưởng đến tương tác dài hạn trong phức hợp enzyme-cơ chất, đặc biệt là ảnh hưởng đến việc sử dụng ái lực cao của ái lực phụ -6.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Results
• Discussion
• Conclusion
• Acknowledgements
• References