Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 10 trang
Dung lượng: 226 KB

Giới thiệu nội dung

Trehalose-phosphate synthesis of Mycobacterium tuberculosis

Tác giả: Y. T. Pan, J. D. Carroll, A. D. Elbein

Lĩnh vực: Biochemistry and Molecular Biology, Microbiology and Immunology

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này mô tả việc phân lập, biểu hiện và đặc tính hóa enzyme trehalose-phosphate synthase (TPS) tái tổ hợp từ Mycobacterium tuberculosis. Enzyme này đóng vai trò quan trọng trong việc tổng hợp trehalose, một loại đường disaccharide có chức năng bảo vệ tế bào trong các điều kiện căng thẳng và là thành phần cấu trúc của thành tế bào vi khuẩn lao. TPS tái tổ hợp được biểu hiện trong Escherichia coli và biểu hiện hoạt tính enzyme. Nghiên cứu đã xác định các đặc tính của enzyme, bao gồm khả năng sử dụng các dẫn xuất nucleoside diphosphate glucose khác nhau làm chất cho glucose và sự cần thiết của glucose-6-phosphate làm chất nhận. Các kết quả này chứng minh rằng TPS của M. tuberculosis là enzyme chịu trách nhiệm chính cho quá trình tổng hợp trehalose-P và là mục tiêu tiềm năng cho các biện pháp can thiệp hóa trị liệu chống bệnh lao.

Mục lục chi tiết:

  • Trehalose-phosphate synthase of Mycobacterium tuberculosis
  • Cloning, expression and properties of the recombinant enzyme
  • Correspondence to:
  • Abbreviations:
  • Materials
  • Western immunoblotting
  • Assay of TPS activity
  • EXPERIMENTAL PROCEDURES
  • Bacterial strains and culture conditions
  • Cloning and expression of M. tuberculosis TPS
  • Sequence analysis of the TPS gene (otsA)
  • Isolation and purification of recombinant TPS
  • Properties of the recombinant TPS
  • Comparison of the colorimetric assay for measuring trehalose-P formation with the coupled enzymatic assay.
  • Substrate specificity of TPS for nucleoside diphosphate glucose.
  • Effect of time and protein concentration on TPS activity.
  • Effect of concentration of glucosyl donor (UDP-glucose or GDP-glucose) on TPS activity.
  • Effect of glucose-6-P concentration on TPS activity.
  • Characterization of the product
  • Trehalose synthesis in mycobacteria
  • DISCUSSION
  • ACKNOWLEDGEMENTS
  • REFERENCES