Báo cáo khoa học: Effect of mutations at Glu160 and Val198 on the thermostability of lactate oxidase

Effect of Mutations at Glu160 and Val198 on the Thermostability of Lactate Oxidase

Tác giả: Hirotaka Minagawa, Jiro Shimada, and Hiroki Kaneko

Lĩnh vực: Enzyme Engineering, Protein Stability

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc nâng cao độ bền nhiệt của enzyme lactate oxidase, một thành phần quan trọng trong các cảm biến đo nồng độ lactate. Các nhà nghiên cứu đã tạo ra hai loại enzyme lactate oxidase biến đổi là E160G và E160G/V198I thông qua các phương pháp đột biến ngẫu nhiên như PCR sai lệch và xáo trộn DNA. Kết quả cho thấy đột biến kép E160G/V198I làm tăng đáng kể độ bền nhiệt của enzyme so với loại E160G và enzyme gốc, trong khi đột biến V198I đơn lẻ không ảnh hưởng nhiều đến độ bền nhiệt của enzyme gốc. Nghiên cứu cũng xem xét vai trò của vị trí 160 và 198 trong cấu trúc protein và ảnh hưởng của chúng đến độ bền nhiệt và hoạt tính xúc tác của enzyme.

Mục lục chi tiết:

• Effect of mutations at Glu160 and Val198 on the thermostability of lactate oxidase
• Materials and methods
• Construction of the mutant lactate oxidase gene
• Lactate oxidase purification and activity measurements
• Results and discussion
• Irreversible enzyme inactivation assay of mutant lactate oxidases at position 160
• Irreversible enzyme-inactivation assay of mutant lactate oxidases at positions 160 and 198
• Stereoview of the model structure of lactate oxidase
• Variation of the atomic temperature factors averaged for the main-chain atoms of spinach glycolate oxidase
• Acknowledgements
• References