Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 13 trang
Dung lượng: 315 KB

Giới thiệu nội dung

Purification, Characterization and Molecular Cloning of Tyrosinase from the Cephalopod Mollusk, Illex Argentinus

Tác giả: Tetsushi Naraoka, Hidemitsu Uchisawa, Haruhide Mori, Hajime Matsue, Seiya Chiba, Atsuo Kimura

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Khoa học Nông nghiệp

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày chi tiết về quá trình tinh sạch, đặc tính hóa và nhân bản phân tử của enzyme tyrosinase (ST94) từ mực Illex argentinus. Enzyme này đã được phân lập từ mực của loài mực này. ST94 là một protein dimer liên kết cộng hóa trị, có khối lượng phân tử 140.2 kDa. Hoạt tính của ST94 tăng lên đáng kể sau khi được xử lý bằng trypsin, tạo thành ST94t với khối lượng phân tử 127.6 kDa. Chuỗi amino acid của ST94 đã được xác định thông qua giải trình tự N-terminal và nhân bản cDNA, cho thấy nó được tổng hợp dưới dạng tiền chất 625 amino acid, sau đó loại bỏ một chuỗi tín hiệu 18 amino acid để tạo thành dạng trưởng thành gồm 607 amino acid. ST94 có hai vị trí gắn đồng có khả năng liên kết với ion đồng, tương tự như hemocyanin từ động vật thân mềm, tyrosinase từ vi sinh vật và động vật có xương sống. Enzyme này xúc tác cho phản ứng oxy hóa cả monophenol và o-diphenol, và thể hiện sự phụ thuộc vào nhiệt độ đối với hoạt tính o-diphenolase, cho thấy đặc tính của một enzyme ưa lạnh.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Vật liệu và phương pháp
  • Tinh sạch tyrosinase ST94
  • Phân tích định lượng
  • Trích xuất RNA và chuẩn bị cDNA sợi đầu tiên
  • Nhân bản và giải trình tự cDNA tyrosinase ST94
  • Phân tích trình tự
  • Kết quả và thảo luận
  • Tinh sạch tyrosinase ST94
  • Hoạt hóa ST94 bằng xử lý trypsin
  • Khối lượng phân tử của tyrosinase mực
  • Đặc tính enzyme của tyrosinase mực
  • Tác động của pH và nhiệt độ lên độ bền và hoạt tính
  • Tác động của nhiệt độ lên hoạt tính o-diphenolase
  • Tác động của chất ức chế
  • Đặc tính cơ chất
  • Nhân bản phân tử cDNA ST94
  • Trình tự amino acid suy luận
  • So sánh trình tự amino acid tại hai vị trí gắn đồng tiềm năng, Cu(A) và Cu(B), trong ST94 và các protein đồng loại 3 khác
  • So sánh trình tự amino acid
  • Cây phát sinh loài của các vùng liên kết đồng
  • Kịch bản tiến hóa của hemocyanin và tyrosinase
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo