Báo cáo khóa học: UV-A/blue-light inactivation of the ‘metal-free’ hydrogenase (Hmd) from methanogenic archaea The enzyme contains functional iron after all

UV-A/blue-light inactivation of the ‘metal-free’ hydrogenase (Hmd) from methanogenic archaea

Tác giả: Erica J. Lyon, Seigo Shima, Gerrit Buurman, Shantanu Chowdhuri, Alfred Batschauer, Klaus Steinbach, Rudolf K. Thauer

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này tập trung vào enzyme H2-forming methylenetetrahydromethanopterin dehydrogenase (Hmd), một loại hydrogenase khác thường được tìm thấy ở các vi khuẩn cổ đại sinh mêtan. Ban đầu được coi là “không chứa kim loại”, các nghiên cứu gần đây đã chỉ ra sự hiện diện của sắt trong enzyme này. Bài báo trình bày bằng chứng cho thấy sắt này đóng vai trò chức năng, đặc biệt là liên quan đến tính nhạy cảm với ánh sáng UV-A và ánh sáng xanh của enzyme. Enzyme và đồng yếu tố (cofactor) của nó bị bất hoạt khi tiếp xúc với ánh sáng, với sự giải phóng sắt xảy ra đồng thời với sự mất hoạt tính. Khả năng ức chế hoạt tính của Hmd bởi carbon monoxide (CO) ở nồng độ cao và khả năng CO bảo vệ enzyme khỏi sự bất hoạt do ánh sáng càng củng cố vai trò chức năng của sắt. Do đó, việc gọi Hmd là “hydrogenase không chứa kim loại” không còn phù hợp nữa.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Vật liệu và phương pháp
• Tinh sạch Hmd holoenzyme
• Tinh sạch Hmd cofactor
• Xác định hoạt tính Hmd
• Xác định hoạt tính cofactor
• Xác định protein
• Xác định sắt
• Phổ UV/nhìn thấy và hàm lượng sắt của Hmd hoạt động
• Bất hoạt Hmd bởi ánh sáng
• Sự bất hoạt và giải phóng sắt của Hmd khi tiếp xúc với ánh sáng
• Sự bất hoạt Hmd bởi ánh sáng xanh
• Sự bất hoạt cofactor Hmd chứa sắt bởi ánh sáng
• Đặc tính xúc tác của Hmd
• Sự ức chế Hmd bởi CO ở nồng độ cao
• Sự bảo vệ khỏi sự bất hoạt bởi ánh sáng của Hmd bởi CO
• Sự bất hoạt cofactor Hmd bởi ánh sáng xanh
• Đặc tính xúc tác của Hmd
• Sự ức chế Hmd bởi xyanua
• Thảo luận
• Tài liệu tham khảo