Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 9 trang
Dung lượng: 191 KB

Giới thiệu nội dung

Kinetics of the Inhibition of Neutrophil Proteinases by Recombinant Elafin and Pre-elafin (Trappin-2) Expressed in Pichia pastoris

Tác giả: Marie-Louise Zani, Shila M. Nobar, Sandrine A. Lacour, Soazig Lemoine, Christian Boudier, Joseph G. Bieth, Thierry Moreau

Lĩnh vực: Biochemistry, Enzyme Kinetics, Molecular Biology, Protease Inhibition

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc biểu hiện và tinh chế elafin và tiền chất của nó là trappin-2 trong hệ thống biểu hiện nấm men Pichia pastoris. Các protein tái tổ hợp này sau đó được đặc trưng về mặt động học ức chế đối với các proteinase của bạch cầu trung tính, cụ thể là elastase bạch cầu trung tính (HNE) và proteinase 3 (PR3), cũng như elastase tụy (PPE). Kết quả cho thấy cả elafin tái tổ hợp và trappin-2 đều là những chất ức chế nhanh chóng và mạnh mẽ, với hằng số tốc độ liên kết (kass) cao và hằng số tốc độ phân ly (kdiss) thấp, dẫn đến các phức hợp bền vững. Nghiên cứu cũng xác định hằng số phân ly cân bằng (Ki) cho tương tác của chúng với các enzyme mục tiêu. Các phát hiện này nhấn mạnh tiềm năng trị liệu của elafin và trappin-2 trong việc kiểm soát các bệnh viêm nhiễm liên quan đến hoạt động quá mức của proteinase.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Materials and Methods
    • Materials
    • Oligonucleotides
    • Cloning of elafin and trappin-2 cDNA into pPIC9
    • Expression in Pichia pastoris
    • Purification of secreted elafin and trappin-2
    • Kinetic measurements
    • Measurement of the active rec-elafin and rec-trappin-2 concentration
    • Determination of the equilibrium dissociation constant Ki for the interaction between PPE and rec-elafin or rec-trappin-2
    • Association kinetics
    • Dissociation kinetics
  • Results
    • Expression and purification of recombinant elafin and trappin-2
    • Determination of the equilibrium dissociation constant Ki for the interaction between PPE and rec-trappin-2 or rec-elafin
    • Measurement of kass and kdiss for the interaction of rec-elafin or rec-trappin-2 with HNE and PR3
  • Discussion
  • References