Báo cáo khoa học: The stop transfer sequence of the human UDPglucuronosyltransferase 1A determines localization to the endoplasmic reticulum by both static retention and retrieval mechanisms

The Stop Transfer Sequence of the Human UDP-Glucuronosyltransferase 1A Determines Localization to the Endoplasmic Reticulum by Both Static Retention and Retrieval Mechanisms

Tác giả: Lydia Barré, Jacques Magdalou, Patrick Netter, Sylvie Fournel-Gigleux and Mohamed Ouzzine

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá cơ chế giữ các protein UGT1A tại lưới nội chất (ER). Các nhà nghiên cứu đã sử dụng protein CD4 làm protein báo cáo để phân tích vai trò của chuỗi dừng truyền (stop transfer sequence) của UGT1A. Kết quả cho thấy chuỗi dừng truyền này đủ để giữ protein CD4 lại trong ER, hoạt động như một tín hiệu định vị ER. Cơ chế này bao gồm cả sự giữ tĩnh (static retention) thông qua miền truyền màng (TMD) và sự thu hồi động (dynamic retrieval) từ các khoang sau ER, được hỗ trợ bởi một tín hiệu thu hồi dilysine (KSKTH) trên đuôi tế bào chất. Độ dài của miền truyền màng cũng đóng vai trò quan trọng trong việc xác định vị trí của protein trong tế bào.

Mục lục chi tiết:

• The stop transfer sequence of the human UDP-glucuronosyltransferase 1A determines localization to the endoplasmic reticulum by both static retention and retrieval mechanisms
• Keywords
• Correspondence
• Abbreviations
• Human UDP-glucuronosyltransferase 1A (UGT1A) isoforms are endoplasmic reticulum (ER)-resident type I membrane proteins responsible for the detoxification of a broad range of toxic phenolic compounds.
• Biosynthesis of integral membrane proteins involves several events such as targeting to the endoplasmic reticulum (ER), translocation of certain domains into the ER lumen and integration of transmembrane domains (TMD) into the lipid bilayer.
• Retention of human UGT1A in endoplasmic reticulum
• Results
• The stop transfer sequence of UGT1A functions as an ER targeting and retention signal in mammalian cells
• Figure 1. Schematic representation of parental UGT1A6 (a member of the UGT1A family), CD4 and chimeric proteins.
• Figure 2. The TMD and CT of the UGT1A stop transfer sequence determine subcellular localization.
• The dilysine motif on the cytoplasmic tail of UGT1A participates in ER retention
• Figure 3. The KSKTH dilysine motif on the cytosolic tail of the UGT1A6 stop transfer sequence acts as ER retention signal.
• The TMD of UGT1A is sufficient for ER retention
• Figure 4. TMD of UGT1A stop transfer sequence determines ER retention.
• TMD length determines the subcellular localization
• Figure 5. The length of the TMD of UGT1A stop transfer sequence determines the subcellular localization.
• Discussion
• Experimental procedures
• Plasmid constructions
• Site-directed mutagenesis
• Expression in HeLa cells and endoglycosidase digestions
• Immunofluorescence microscopy
• Acknowledgements
• References