Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 172 KB

Giới thiệu nội dung

Enzymatic Properties of Chitinase A from Vibrio carchariae

Tác giả: Wipa Suginta, Archara Vongsuwan, Chomphunuch Songsiriritthigul, Jisnuson Svasti, and Heino Prinz

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Khoa học protein

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích chi tiết các đặc tính enzyme của chitinase A từ vi khuẩn Vibrio carchariae, bao gồm cả dạng tự nhiên và các dạng đột biến tại vị trí hoạt động. Phương pháp kết hợp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) và khối phổ điện tử phun sương (ESI-MS) đã được sử dụng để phân tách và giám sát đồng thời các sản phẩm chitooligosaccharide. Kết quả cho thấy enzyme này chủ yếu tạo ra các sản phẩm β-anomer, cho thấy cơ chế thủy phân giữ nguyên cấu hình anomer. Enzyme thể hiện đặc tính nội phân (endo), yêu cầu tối thiểu hai liên kết glycosidic để thủy phân và có ái lực cao hơn với các chitooligomer có khối lượng phân tử lớn hơn. Các đột biến tại các vị trí Glu315 và Asp392 đã được tạo ra để làm sáng tỏ vai trò của chúng trong hoạt động xúc tác. Đáng chú ý, dạng đột biến D392N vẫn giữ hoạt tính chitinase đáng kể và thể hiện hiệu quả tổng hợp oligosaccharide vượt trội so với dạng tự nhiên, trong khi các đột biến E315M và E315Q làm mất hoàn toàn hoạt tính.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Keywords
  • Chitinase A; chitooligosaccharides; quantitative HPLC-MS; transglycosylation; Vibrio carchariae
  • Correspondence
  • Abbreviations
  • Results
  • Characterization of chitooligosaccharide products
  • Stereochemistry of chitin hydrolysis
  • Quantitative analysis of chitooligosaccharide hydrolysis by native chitinase A
  • Steady-state kinetics of chitinase A with various substrates
  • Protein expression and hydrolytic activity of the wild-type chitinase A and mutants
  • Oligosaccharide synthesis by chitinase A
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Materials
  • Instrumentation
  • Preparation of chitinase A
  • Site-directed mutagenesis
  • Hydrolytic action of chitinase A on chitooligosaccharides and chitin
  • Kinetic measurements
  • Stereochemistry of product anomers
  • Transglycosylation of chitinase A
  • Immunodetection
  • SDS/PAGE following the chitinase activity assay
  • Acknowledgements
  • References