Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 15 trang
Dung lượng: 199 KB

Giới thiệu nội dung

Utility Of Epimerization Domains For The Redesign Of Nonribosomal Peptide Synthetases

Tác giả: Daniel B. Stein, Uwe Linne and Mohamed A. Marahiel

Lĩnh vực: Chemie/Biochemie, Philipps-Universität Marburg, Germany

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này điều tra đặc tính nhận biết cơ chất của bốn miền epimer hóa (E domains) khác nhau từ các hệ thống tổng hợp peptide phi ribosome (NRPSs). Các miền E này, bao gồm hai miền ‘peptidyl-‘ và hai miền ‘aminoacyl-‘, đã được thử nghiệm với các tiền chất peptidyl-CoA. Các kết quả cho thấy rằng các miền E có khả năng dung nạp nhiều loại tiền chất peptidyl-S-Ppant, bao gồm cả những tiền chất được biến đổi N-methyl hóa. Đặc biệt, các miền ‘aminoacyl-‘E, thường có trong các mô-đun khởi tạo, có khả năng chuyển đổi các tiền chất peptidyl-S-Ppant, điều này có ý nghĩa quan trọng đối với các nỗ lực kỹ thuật trong tương lai. Ngoài ra, nghiên cứu còn chỉ ra rằng miền ngưng tụ (C domain) của TycB₁ cũng có khả năng xử lý các tiền chất peptidyl được chuyển bởi TycA, nhấn mạnh tiềm năng cho việc thiết kế các enzyme lai.

Mục lục chi tiết:

  • Utility of epimerization domains for the redesign of nonribosomal peptide synthetases
  • Correspondence
  • Keywords
  • Abstract
  • Introduction
  • Results
  • Generation and purification of the recombinant enzymes
  • Use of synthetic peptidyl-CoAs with Sfp and PCP-E bidomain constructs for assaying epimerization activity
  • Epimerization activity of TycB3- and FenD2-PCP-E
  • Epimerization activity of TycA- and GrsA-PCP-E
  • Epimerization activity with N-methylated peptidyl substrates
  • Elongation of peptidyl substrates by the C domain of TycB1
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Cloning of PCP-E genes, expression and protein purification
  • Synthesis of peptidyl-CoAs
  • Priming of enzymes with CoASH or peptidyl-CoA precursors and Sfp
  • Assay for detection of peptidyl-S-Ppant epimerization
  • Assay for elongation of peptidyl substrates by the C domain of TycB1
  • Acknowledgements
  • References