Báo cáo khoa học: Characterization of testis-specific serine–threonine kinase 3 and its activation by phosphoinositide-dependent kinase-1-dependent signalling

Characterization of testis-specific serine–threonine kinase 3

Tên đề tài: Characterization of testis-specific serine–threonine kinase 3 and its activation by phosphoinositide-dependent kinase-1-dependent signalling

Tác giả: Marta Bucko-Justyna, Leszek Lipinski, Boudewijn M. Th. Burgering, Lech Trzeciak

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh, Di truyền học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định đặc tính và cơ chế điều hòa của kinase serine-threonine đặc hiệu cho tinh hoàn 3 (TSSK3). Các nhà nghiên cứu đã phân lập và phân tích các đặc tính sinh hóa của TSSK3, bao gồm khả năng tự phosphoryl hóa và phosphoryl hóa các protein đích như histone, myelin basic protein và casein. Kết quả cho thấy TSSK3 có hoạt tính kinase tối đa ở 30°C, phù hợp với việc nó là một kinase đặc hiệu cho tinh hoàn. Nghiên cứu cũng xác định một “vòng T” (T-loop) trong miền xúc tác của TSSK3, tương tự như trong các kinase họ AGC. Việc đột biến threonine trong vòng T thành alanine đã làm mất hoạt tính kinase, trong khi phosphoryl hóa bởi kinase phụ thuộc phosphoinositide-1 (PDK1) làm tăng hoạt tính kinase của TSSK3. Ngoài ra, một chuỗi peptide RRSSSY đã được xác định là cơ chất hiệu quả và đặc hiệu cho phosphoryl hóa bởi TSSK3. Nghiên cứu này cung cấp hiểu biết sâu sắc về vai trò và cơ chế điều hòa của TSSK3, mở ra hướng đi mới cho việc nghiên cứu các chức năng của nó trong tinh hoàn và các ứng dụng tiềm năng trong lĩnh vực vô sinh nam hoặc phát triển thuốc tránh thai.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Cloning, expression and substrates phosphorylation of TSSK3
• Characterization of the optimal conditions required for maximal kinase activity of the purified recombinant TSSK3
• TSSK3 kinase can be activated by autophosphorylation or PDK1-mediated phosphorylation within activation/T-loop motif
• TSSK3 can be activated in mammalian cells by insulin
• TSSK3 specifically phosphorylates in vitro the amino acid sequence motif RRSSSY
• Discussion
• Experimental procedures
• TSSK3 constructs
• GST-TSSK3 protein purification from E. coli
• PepChip analysis, cloning, purification and phosphorylation of GST peptides
• Substrate phosphorylation assays
• TSSK3 in vitro phosphorylation and activation assays
• Cells and transfections
• Antibodies
• Phosphoamino acid analysis
• Acknowledgements
• References