Báo cáo khoa học: Secretion of proteases in serglycin transfected Madin–Darby canine kidney cells

Secretion of proteases in serglycin transfected Madin-Darby canine kidney cells

Tác giả: Lillian Zernichow, Knut T. Dalen, Kristian Prydz, Jan-Olof Winberg, Svein O. Kolset

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử, Dinh dưỡng

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc điều tra mối liên hệ giữa serglycin và sự tiết protease trong các tế bào thận Madin-Darby canine (MDCK) đã được chuyển gen. Các tế bào MDCK, vốn không biểu hiện serglycin, đã được chuyển gen serglycin người có gắn thẻ polyhistidine (His-tag). Các dòng tế bào biểu hiện serglycin ở các mức độ khác nhau đã được tạo ra. Kết quả cho thấy sự chuyển gen serglycin vào tế bào MDCK dẫn đến những thay đổi trong mức độ tiết của các protease nội sinh. Cụ thể, dòng tế bào có mức độ biểu hiện mRNA serglycin, lượng serglycin được phân lập và lượng protein lõi serglycin cao nhất cũng cho thấy sự tiết protease cao nhất. Nghiên cứu này cung cấp cái nhìn sâu sắc về quá trình sinh tổng hợp và tiết serglycin, cũng như các phân tử đối tác tiềm năng của nó, và thiết lập hệ thống tế bào MDCK chuyển gen serglycin như một mô hình hữu ích để nghiên cứu mối quan hệ giữa proteoglycans và enzyme quan trọng trong các điều kiện sinh lý và bệnh lý.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Kết quả
• Chuyển gen serglycin
• Phân tích proteoglycan
• Các đại phân tử được đánh dấu 35S
• Phân lập serglycin His-tag
• Western blotting của serglycin
• Phân tích enzyme
• Các cơ chất nhuộm màu
• Gelatin và plasminogen-gelatin zymography
• Thảo luận
• Quy trình thực nghiệm
• Nuôi cấy tế bào và chuyển gen
• Chuẩn bị và phân tích RNA
• Phân tích Proteoglycan
• Đánh dấu phóng xạ các đại phân tử
• Phân lập serglycin His-tag
• Western blotting của serglycin
• Phân tích enzyme
• Các cơ chất nhuộm màu
• Gelatin và plasminogen-gelatin zymography
• Tài liệu tham khảo