Báo cáo khoa học: The guanine nucleotide exchange factor RasGRF1 directly binds microtubules via DHPH2-mediated interaction

The Guanine Nucleotide Exchange Factor RasGRF1 Directly Binds Microtubules via DHPH2-Mediated Interaction

Tác giả: Greta Forlani, Simona Baldassa, Paola Lavagni, Emmapaola Sturani and Renata Zippel

Lĩnh vực: Department of Biomolecular Sciences and Biotechnology, University of Milan, Italy

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này cho thấy RasGRF1, một yếu tố trao đổi nucleotide guanine, tương tác trực tiếp với vi ống thông qua miền DHPH2. Phân tích trong ống nghiệm và trong tế bào chỉ ra rằng RasGRF1 liên kết chặt chẽ với vi ống. Miền DHPH2 là yếu tố chính chịu trách nhiệm cho sự tương tác này, thể hiện ái lực cao và tỉ lệ mol xác định. Mặc dù RasGRF1 không ảnh hưởng đến động lực học vi ống, sự hiện diện của nó có thể liên quan đến các quá trình tế bào khác. Nghiên cứu này làm sáng tỏ một vai trò mới của RasGRF1 và mở ra hướng đi mới để hiểu mạng lưới tín hiệu phức tạp mà nó tham gia.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• RasGRF is a family of guanine nucleotide exchange factors…
• Microtubules are crucial elements in the generation and maintenance of neuronal morphology.
• RasGRF is a family of guanine nucleotide exchange factors…
• Abbreviations
• RasGRF1 directly binds microtubules
• Results
• Interaction of RasGRFs with microtubules
• Fig. 1. Distribution of RasGRF1 and RasGRF2 in mouse brain extracts.
• Fig. 2. RasGRFs cosediment with in vitro assembled microtubules.
• Fig. 3. Motor proteins or MAPs do not mediate RasGRF1 association with microtubules.
• The DHPH2 module directly interacts with microtubules
• Fig. 4. RasGRF1 binds to pure microtubules.
• Fig. 5. DHPH2 domain of RasGRF1 binds directly to microtubules.
• Fig. 6. Kinetics of DHPH2 binding to microtubules.
• Fig. 7. DHPH2 domain competes with RasGRF1 for microtubule binding.
• The DHPH2 module does not affect in vitro microtubule dynamics
• Fig. 8. DHPH2 tandem does not affect in vitro microtubule dynamics.
• Colocalization of Ras-GRF1 with microtubules in intact cells
• Fig. 9. Sodium arsenate induces association of the N-terminal region of RasGRF1 with microtubules in COS7 cells.
• Fig. 10. Ras-GRF1 partially colocalizes with microtubules in a neuron-like cell line.
• Discussion
• Experimental procedures
• Plasmids
• Cell culture and transfections
• Immunofluorescence analysis
• Expression and purification of RasGRF1 recombinant proteins
• Microtubule cosedimentation assays
• Binding assays
• Assembly and disassembly of microtubules in vitro
• Antibodies and chemicals
• References