Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: 200 KB

Giới thiệu nội dung

Crystal Structure and Enzymatic Properties of a Bacterial Family 19 Chitinase Reveal Differences from Plant Enzymes

Tác giả: Ingunn A. Hoell, Bjørn Dalhus, Ellinor B. Heggset, Stein I. Aspmo, and Vincent G. H. Eijsink

Lĩnh vực: Hóa sinh, Công nghệ sinh học, Khoa học thực phẩm

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả quá trình nhân bản, biểu hiện quá mức, tinh sạch, đặc tính hóa và cấu trúc tinh thể của chitinase G, một chitinase đơn miền thuộc họ 19 từ vi khuẩn Gram dương Streptomyces coelicolor A3(2). Mặc dù chitinase G không có khả năng giải phóng 4-methylumbelliferyl từ các cơ chất chitooligosaccharide nhân tạo, nó có khả năng phân giải các chitooligosaccharide dài hơn với tốc độ tương đương với các chitinase khác. Enzyme này cũng có khả năng phân giải một cơ chất chitin keo màu (carboxymethyl-chitin-remazol-brilliant violet) và một phân số nhỏ của chitin dạng vô định hình (α-chitin và β-chitin), nhưng không có khả năng phân giải hoàn toàn chitin dạng tinh thể. Cấu trúc tinh thể của chitinase G và một chitinase họ 19 liên quan từ vi khuẩn Streptomyces, chitinase C, cho thấy các chitinase họ 19 ở vi khuẩn này thiếu một số vòng lặp mở rộng rãnh liên kết cơ chất so với các chitinase họ 19 ở thực vật. Phân tích chi tiết sự phân giải chitooligosaccharide của chitinase G chỉ ra rằng enzyme này chỉ có bốn vị trí phụ (-2 đến +2), trái ngược với sáu vị trí phụ (-3 đến +3) ở các enzyme thực vật. Sự khác biệt cấu trúc nổi bật nhất dẫn đến việc thu hẹp rãnh liên kết cơ chất là sự thiếu hụt một vòng lặp 13 gốc axit amin giữa hai gốc glutamate được cho là có vai trò xúc tác. Vai trò của hai gốc này trong quá trình xúc tác đã được xác nhận bằng nghiên cứu đột biến định hướng vị trí.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Cấu trúc tinh thể và tính chất enzyme của chitinase họ 19 vi khuẩn
  • Kết quả
  • Cấu trúc
  • Thảo luận
  • Thủ tục thực nghiệm
  • Kỹ thuật DNA
  • Sản xuất và tinh sạch protein tái tổ hợp
  • Xác định cấu trúc và tin sinh học
  • Enzymology
  • Tài liệu tham khảo