Báo cáo khoa học: Cleavage site analysis of a serralysin-like protease, PrtA, from an insect pathogen Photorhabdus luminescens and development of a highly sensitive and specific substrate

Cleavage site analysis of a serralysin-like protease, PrtA, from an insect pathogen Photorhabdus luminescens and development of a highly sensitive and specific substrate

Tác giả: Judit Marokházi, Nikolett Mihala, Ferenc Hudecz, András Fodor, László Gráf, István Venekei

Lĩnh vực: Biochemistry, Organic Chemistry, Peptide Chemistry, Biotechnology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phát triển một cơ chất nhạy và đặc hiệu cho protease A (PrtA), một enzyme thuộc nhóm serralysin-like từ vi sinh vật gây bệnh trên côn trùng Photorhabdus. Các nhà nghiên cứu đã điều tra vị trí cắt của PrtA trên các peptide sinh học và peptide tổng hợp để xác định các vị trí ưu tiên cho sự thủy phân. Dựa trên kết quả này, một cơ chất huỳnh quang được gắn bộ phận dập tắt đã được tổng hợp, cho phép đo lường chính xác hoạt động của PrtA. Nghiên cứu cũng đánh giá độ nhạy và đặc hiệu của cơ chất này, so sánh với các enzyme khác, và ứng dụng để theo dõi hoạt động của PrtA trong các mẫu sinh học từ côn trùng bị nhiễm bệnh. Kết quả cho thấy PrtA có vai trò tiềm năng trong việc thiết lập sự nhiễm trùng và trong quá trình chuyển hóa sinh học.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results and Discussion
• Identification of PrtA cleavage sites in biological peptides
• Optimization of peptide sequence and length
• Sensitivity and selectivity of the Dabcyl-EVYAVES-Edans substrate and the activity of PrtA
• PrtA activity in biological samples from Photorhabdus-infected insects
• Experimental procedures
• Enzymes
• Biological peptides and the materials of substrate synthesis
• Peptide synthesis
• Bacterium strains and culturing
• Experiments with insect larvae
• Identification of PrtA cleavage sites in biological peptides
• Hydrolysis of synthetic peptides
• Use of the Dabcyl–EVYAVES–Edans substrate: determination of the excitation and emission wavelengths, the change in molar fluorescence and correction of the inner filter effect
• Mesurement of PrtA activity and specificity of the Dabcyl-EVYAVES-Edans substrate
• Measurements of PrtA activity in insect haemolymph and body homogenate
• Acknowledgements
• References