Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 189 KB

Giới thiệu nội dung

The Relative Contribution of Mannose Salvage Pathways to Glycosylation in PMI-Deficient Mouse Embryonic Fibroblast Cells

Tác giả: Naonobu Fujita, Ayako Tamura, Aya Higashidani, Takashi Tonozuka, Hudson H. Freeze, và Atsushi Nishikawa

Lĩnh vực: Sinh học Tế bào, Hóa sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của các con đường chuyển hóa mannose “cứu vãn” (salvage pathways) trong quá trình glycosyl hóa tại các tế bào sợi cơ phôi thai chuột thiếu hụt enzyme phosphomannose isomerase (PMI). Các tác giả đã sử dụng tế bào sợi cơ thiếu PMI để đánh giá sự đóng góp của các con đường này, vốn không phụ thuộc vào sự chuyển hóa glucose, vào quá trình glycosyl hóa protein, đặc biệt là DNase I. Kết quả cho thấy các con đường cứu vãn mannose, bao gồm cả các quá trình diễn ra trong lysosome và các con đường không phụ thuộc lysosome, đóng góp đáng kể vào việc cung cấp mannose cho glycosyl hóa, đặc biệt khi nguồn cung cấp từ glucose bị hạn chế. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng sự phân hủy glycoconjugate trong lysosome ở điều kiện pH thấp là nguồn cung cấp mannose quan trọng, và khi có sự hiện diện của huyết thanh thai nhi, sự phân hủy các glycoconjugate nội sinh là nguồn chính.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Kết quả
  • Xác định hiệu quả glycosyl hóa bằng phương pháp biểu hiện protein DNase I đột biến
  • Hiệu quả glycosyl hóa của DNase I đột biến trong tế bào sợi cơ CDG-Ib
  • Ảnh hưởng của swainsonine và bafilomycin A1 lên glycosyl hóa
  • Bổ sung mannose khắc phục tình trạng thiếu hụt glycosyl hóa
  • Sự biểu hiện quá mức của SKD1E235Q ức chế mạnh mẽ quá trình glycosyl hóa lõi trong tế bào PMI-null
  • Đóng góp của glycoprotein huyết thanh và glycoconjugate nội sinh vào các con đường cứu vãn mannose
  • Thảo luận
  • Quy trình thực nghiệm
  • Nguyên liệu
  • Chuẩn bị plasmid và adenovirus
  • Nuôi cấy tế bào và nhiễm virus
  • Phân tích miễn dịch và phân tích glycosyl hóa
  • Xử lý bằng glycosidase
  • Xử lý bằng swainsonine và bafilomycin A1
  • Định lượng mannose
  • Sự biểu hiện quá mức của GFP-SKD1E235Q
  • Kính hiển vi huỳnh quang
  • Điều kiện đo trong môi trường không có huyết thanh
  • Ủ lâu trong môi trường không có mannose
  • Phân tích LLO
  • Tài liệu tham khảo