Báo cáo khoa học: Study of uptake of cell penetrating peptides and their cargoes in permeabilized wheat immature embryos

Study of uptake of cell penetrating peptides and their cargoes in permeabilized wheat immature embryos

Tác giả: Archana Chugh and François Eudes

Lĩnh vực: Lethbridge Research Centre, Agriculture and Agri-Food Canada, Alberta, Canada

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc khảo sát sự hấp thu của các peptide xuyên màng tế bào (cell-penetrating peptides – CPPs) và các phân tử mang theo bởi chúng trong phôi lúa mì chưa trưởng thành đã được làm thấm. Kết quả cho thấy việc xử lý phôi bằng tác nhân làm thấm màng tế bào giúp tăng đáng kể khả năng hấp thu CPPs, điều mà phôi không được xử lý không đạt được. Các peptide Tat monomer và dimer đã chứng minh hiệu quả cao trong việc vận chuyển enzyme β-glucuronidase (GUS) vào phôi đã làm thấm, vượt trội hơn so với phôi không làm thấm. Nghiên cứu cũng xem xét sự hình thành phức hợp giữa peptide Tat2 và DNA plasmid mang gen GUS, và khả năng vận chuyển DNA hiệu quả của phức hợp này vào phôi, dẫn đến biểu hiện gen GUS tạm thời. Các thí nghiệm với chất ức chế cũng gợi ý rằng nhiều cơ chế tham gia đồng thời vào quá trình hấp thu phức hợp peptide-hàng hóa trong phôi lúa mì.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Introduction
• Cellular uptake of CPPs is enhanced remarkably by permeabilization treatment of immature embryos
• GUS enzyme delivery by Tat peptides in immature embryos
• Effect of inhibitors on Tat2-mediated GUS enzyme delivery in permeabilized embryos
• Peptide-DNA complex formation as observed under confocal laser microscope
• Tat2-mediated plasmid DNA delivery: transient GUS gene expression in the immature embryos
• Discussion
• Experimental procedures
• Isolation and surface sterilization of wheat immature embryos
• Peptide synthesis and fluorophore labelling
• Translocation of fluorescein labeled cell penetrating peptides in zygotic embryos using cell membrane permeabilizing agent
• Fluorescence microscopy
• Fluorimetric analysis
• Preparation and delivery of CPP – GUS enzyme cargo complex in wheat immature embryos
• GUS histochemical assay
• Effect of inhibitors on delivery of Tat2-GUS enzyme complex
• CPP-plasmid DNA complex uptake by permeabilized immature embryos
• Tat2-plasmid DNA complex formation studies
• Gel retardation assay
• DNaseI protection assay
• Confocal laser microscopy
• Transfection of permeabilized immature embryos with Tat2-plasmid DNA complex
• Acknowledgements
• References