Báo cáo Y học: A comparative biochemical and structural analysis of the intracellular chorismate mutase (Rv0948c) from Mycobacterium tuberculosis H37Rv and the secreted chorismate mutase (y2828) from Yersinia pestis

A Comparative Biochemical and Structural Analysis of the Intracellular Chorismate Mutase (Rv0948c) from Mycobacterium tuberculosis H37Rv, and the Secreted Chorismate Mutase (y2828) from Yersinia pestis

Tác giả: Sook-Kyung Kim, Sathyavelu K. Reddy, Bryant C. Nelson, Howard Robinson, Prasad T. Reddy, and Jane E. Ladner

Lĩnh vực: Biochemical Science Division, Chemical Science and Technology Laboratory, National Institute of Standards and Technology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày một phân tích so sánh về mặt sinh hóa và cấu trúc của hai enzyme chorismate mutase (CM): một enzyme nội bào từ *Mycobacterium tuberculosis* H37Rv (Rv0948c) và một enzyme ngoại bào từ *Yersinia pestis* (y2828). Phân tích cấu trúc X-quang của cả hai protein đã được thực hiện, cho thấy chúng đều là các homodimer cấu tạo hoàn toàn từ các chuỗi alpha-helical. Nghiên cứu cũng so sánh động học enzyme, bao gồm các tham số kcat và Km, và thảo luận về mối liên hệ giữa cấu trúc và hoạt tính, đặc biệt là sự khác biệt trong các chuỗi ở đầu C-terminal và vai trò của các axit amin trong vị trí hoạt động. Kết quả cho thấy enzyme từ *M. tuberculosis* có hoạt tính thấp hơn so với enzyme từ *Y. pestis* do sự thiếu hụt một số dư lượng quan trọng trong vị trí hoạt động.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Present addresses
• Abbreviations
• Introduction (implied by the flow of the text)
• Results and Discussion
• Annotation of CMs in M. tuberculosis H37Rv
• Production and purification of MtCM
• Purification of *YpCM from the periplasmic fluid of E. coli
• Kinetic measurements
• Crystal structure of 90-MtCM
• Active site of 90-MtCM
• Crystal structure of *YpCM
• Classification of MtCM
• Experimental procedures
• Materials
• E. coli strains and plasmids
• Cloning of Rv0948c and MT0975 genes
• Cloning and expression of the *YpCM gene (y2828) in E. coli
• Production and purification of native MtCM
• Production and purification of selenomethionine *YpCM
• Crystallization of 90-MtCM
• Crystallization of *YpCM
• Data collection for 90-MtCM
• Structure determination for 90-MtCM
• Data collection for *YpCM
• *YpCM structure determination
• Other methods
• Disclaimer
• Acknowledgements
• References