Báo cáo khoa học: Importance of tyrosine residues of Bacillus stearothermophilus serine hydroxymethyltransferase in cofactor binding and L-allo-Thr cleavage Crystal structure and biochemical studies

Importance of Tyrosine Residues of Bacillus Stearothermophilus Serine Hydroxymethyltransferase in Cofactor Binding and L-allo-Thr Cleavage

Tác giả: B. S. Bhavani, V. Rajaram, Shveta Bisht, Purnima Kaul, V. Prakash, M. R. N. Murthy, N. Appaji Rao, and H. S. Savithri

Lĩnh vực: Hóa sinh, Cấu trúc protein, Enzim học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của các gốc tyrosine (Y51 và Y61) trong enzyme Serine Hydroxymethyltransferase (SHMT) từ Bacillus stearothermophilus (bsSHMT). Bằng cách sử dụng các phương pháp cấu trúc tinh thể và nghiên cứu sinh hóa, bài báo tập trung vào cơ chế hoạt động của bsSHMT, đặc biệt là quá trình phân cắt L-allo-Thr độc lập với tetrahydrofolate (THF). Các đột biến tại Y51 và Y61 đã được tạo ra để đánh giá ảnh hưởng của chúng đến chức năng enzyme. Kết quả cho thấy các gốc tyrosine này đóng vai trò quan trọng trong việc gắn kết cofactor pyridoxal 5′-phosphate (PLP) và trong quá trình xúc tác phân cắt L-allo-Thr. Một cơ chế mới cho quá trình phân cắt các amino acid 3-hydroxy thông qua việc trừ proton Cα được đề xuất.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Từ khóa
• Cấu trúc tinh thể và các nghiên cứu sinh hóa
• Thảo luận kết quả và các đột biến
• Đặc tính quang phổ và cấu trúc
• Aldimine nội tại
• Phức hợp với Gly/L-Ser
• Cấu trúc tinh thể và các nghiên cứu sinh hóa
• Phức hợp L-allo-Thr
• Cơ chế phân cắt L-allo-Thr độc lập với THF của bsSHMT
• Phương pháp thực nghiệm
• Đột biến định hướng
• Biểu hiện và tinh sạch Y51F, Y61F và Y61A bsSHMT
• Các phép định lượng enzyme
• Phương pháp quang phổ
• Định lượng PLP tại vị trí hoạt động
• Khử bằng sodium cyanoborohydride (NaCNBH3)
• Kết tinh, thu thập và xử lý dữ liệu
• Cấu trúc tinh thể và các nghiên cứu sinh hóa
• Tài liệu tham khảo