Báo cáo khoa học: Crystal and solution structure, stability and post-translational modifications of collapsin response mediator protein 2

Crystal and solution structure, stability and post-translational modifications of collapsin response mediator protein 2

Tên đề tài: Crystal and solution structure, stability and post-translational modifications of collapsin response mediator protein 2

Tác giả: Viivi Majava, Noora Löytynoja, Wei-Qiang Chen, Gert Lubec, Petri Kursula

Lĩnh vực: Hóa sinh, Y sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc làm sáng tỏ cấu trúc tinh thể và cấu trúc trong dung dịch của protein điều hòa phản ứng collapsin 2 (CRMP-2). Các nhà nghiên cứu đã xác định cấu trúc của CRMP-2 ở độ phân giải 1.9 Å trong điều kiện không có calcium nhưng có sự hiện diện của ion magie. Nghiên cứu cũng khảo sát ảnh hưởng của các ion hóa trị hai (Ca²⁺ và Mg²⁺) lên độ ổn định và trạng thái oligomer của CRMP-2, sử dụng các phương pháp như phổ CD, phương pháp Thermofluor, sắc ký lọc gel và tán xạ tia X góc nhỏ. Ngoài ra, một số các sửa đổi sau dịch mã của CRMP-2 từ não chuột cống đã được xác định và ánh xạ lên cấu trúc tinh thể. Dữ liệu thu thập được cung cấp cái nhìn sâu sắc hơn về cấu trúc và tính chất của CRMP-2, mở ra những hướng đi mới cho việc nghiên cứu chức năng và tương tác của protein này.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Database
• Crystal and solution structure, stability and post-translational modifications of collapsin response mediator protein 2
• Abbreviations
• Structural properties of CRMP-2
• CD spectroscopic analysis of CRMP-2 conformation and stability in solution
• Test for heat stability of CRMP-2 using the Thermofluor method
• Divalent cations promote the tetramerization of CRMP-2
• The structure of CRMP-2 in the absence of calcium ions
• Analysis of the packing
• Comparison with the structure in the presence of calcium
• Small-angle X-ray scattering
• Analysis of ion binding by surface plasmon resonance
• The detection of several isoforms of CRMP-2 in rat hippocampus using 2D electrophoresis and MS
• Mapping of the post-translational modifications onto the crystal structure of CRMP-2
• Discussion
• The effects of divalent cations on the stability and oligomeric status of CRMP-2
• Post-translational modifications and previously characterized mutations of CRMP-2
• Conclusions
• Experimental procedures
• Protein purification
• CD spectroscopy
• Stability analysis by the Thermofluor method
• Size exclusion chromatography
• Crystallization, data collection and structure solution
• Surface plasmon resonance
• Small-angle X-ray scattering
• 2D electrophoresis and MS
• Materials
• Sample preparation
• 2D gel electrophoresis
• In-gel digestion
• Protein identification and characterization by nano-LC-ESI-MS/MS
• Acknowledgements
• References
• Supporting information