Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 13 trang
Dung lượng: 232 KB

Giới thiệu nội dung

A Novel ẞ-N-acetyl-D-hexosaminidase from the Insect Ostrinia furnacalis (Guenée)

Tên đề tài: A Novel ẞ-N-acetyl-D-hexosaminidase from the Insect Ostrinia furnacalis (Guenée)

Tác giả: Qing Yang, Tian Liu, Fengyi Liu, Mingbo Qu và Xuhong Qian

Lĩnh vực: Sinh học & Công nghệ sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc phân lập, tinh sạch và đặc tính hóa một enzyme β-N-acetyl-D-hexosaminidase mới (OfHex1) từ ấu trùng ruồi đục thân ngô châu Á, Ostrinia furnacalis. Enzyme OfHex1 đã được tinh sạch 1468 lần và có khối lượng phân tử là 67.0 kDa dưới điều kiện biến tính, nhưng là một dimer với khối lượng 128 kDa dưới điều kiện không biến tính. Enzyme này có điểm đẳng điện (pI) là 4.7 và hoạt động như một enzyme exo-splitting, cắt một đơn vị β-GlcNAc từ đầu không khử của các cơ chất, ưu tiên các cơ chất ngắn hơn. OfHex1 có thể thủy phân p-nitrophenyl β-GlcNAc, p-nitrophenyl β-GalNAc và các chito-oligosaccharides (từ 2 đến 6 đơn vị), nhưng không thủy phân các phức hợp N-glycan hay chitin polymer dài. Phân tích trình tự cDNA cho thấy OfHex1 khác biệt với các enzyme β-N-acetyl-D-hexosaminidase đã biết có hoạt tính thủy phân N-glycan. Mức độ biểu hiện mRNA của OfHex1 tăng đáng kể trước giai đoạn lột xác, cho thấy vai trò của nó trong quá trình chuyển hóa chitin của côn trùng và tiềm năng trở thành mục tiêu cho phát triển thuốc trừ sâu thân thiện với môi trường.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Kết quả
  • Tinh sạch OfHex1
  • Đặc tính hóa OfHex1
  • Đặc tính động học và phổ hoạt động của OfHex1
  • Chitin
  • GnGn-PA (TaKaRa, Japan)
  • Phân tích trình tự cDNA và amino acid suy luận
  • Mức độ biểu hiện mRNA của OfHEX1
  • Thảo luận
  • Quy trình thực nghiệm
  • Tinh sạch protein
  • Đo hoạt tính enzyme và nồng độ protein
  • Chiết xuất côn trùng thô
  • Sắc ký trao đổi ion, bước đầu tiên
  • Sắc ký hydroxyapatite
  • Sắc ký trao đổi ion, bước thứ hai
  • Sắc ký lọc gel
  • Đặc tính hóa protein
  • Điện di gel
  • Đo khối lượng phân tử và xác định dimer
  • Dấu vân tay peptide và phân tích trình tự amino acid
  • Phổ pH và nhiệt độ
  • Xác định chế độ thủy phân bằng HPLC
  • Đặc tính hóa học và động học của cơ chất
  • Phân tích trình tự cDNA của OfHex1
  • Mức độ biểu hiện mRNA của OfHEX1
  • Tài liệu tham khảo
  • Thông tin bổ sung