High-Level Recombinant Protein Production in CHO Cells Using Lentiviral Vectors and the Cumate Gene-Switch

High-Level Recombinant Protein Production in CHO Cells Using Lentiviral Vectors and the Cumate Gene-Switch

Tác giả: Bruno Gaillet, Rénald Gilbert, Sophie Broussau, Amélie Pilotte, Félix Malenfant, Alaka Mullick, Alain Garnier, Bernard Massie

Lĩnh vực: Biotechnology and Bioengineering

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày một hệ thống sản xuất protein tái tổ hợp hiệu quả trong tế bào CHO (Chinese Hamster Ovary) bằng cách sử dụng vector lentiviral (LV) và cơ chế điều chỉnh biểu hiện gen cumate gene-switch. Hệ thống này cho phép tạo ra các quần thể tế bào CHO biểu hiện ổn định protein tái tổ hợp với số lượng lớn trong vòng chưa đầy hai tháng, bắt đầu từ cDNA. Phương pháp kết hợp vector lentiviral cho sự chuyển gen ổn định và bộ điều chỉnh cumate gene-switch cho phép kiểm soát biểu hiện gen một cách cảm ứng và hiệu quả. Nghiên cứu đã chứng minh khả năng sản xuất các protein trị liệu phức tạp như kháng thể, protein dung hợp và erythropoietin với năng suất cao, đạt mức miligram, trong môi trường nuôi cấy lơ lửng không chứa huyết thanh, phù hợp cho các nghiên cứu tiền lâm sàng.

Mục lục chi tiết:

• ABSTRACT
• Introduction
• Materials and Methods
• Cells and Culture Conditions
• Plasmids Used in the Present Study
• LVs Production by Transient Transfection
• Production of LV by VPCL
• Transduction and Titration of LVs
• Transduction of CHO Cells Using LVs and Cell Cloning
• Stable Recombinant Protein Production in CHO Cells
• Results
• Description of the Lentiviral Vector/CHO Expression System
• Determination of Optimal Production Conditions With LV-SEAP
• Long-Term Expression of GFP in CHO-cTA Cells After Transduction With LV
• Production of chB43, CD200Fc, and EPO With LV
• Quantitative Real-Time PCR
• Mass Spectrometry
• Cloning of the CHO Pool
• Discussion
• References