Báo cáo Y học: ORF6 from the clavulanic acid gene cluster of Streptomyces clavuligerus has ornithine acetyltransferase activity

ORF6 from the clavulanic acid gene cluster of Streptomyces clavuligerus has ornithine acetyltransferase activity

Tác giả: Nadia J. Kershaw, Heather J. McNaughton, Kirsty S. Hewitson, Helena Hernández, John Griffin, Claire Hughes, Philip Greaves, Barry Barton, Carol V. Robinson and Christopher J. Schofield

Lĩnh vực: Hóa sinh, Di truyền học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định chức năng của gen orf6 thuộc cụm gen sinh tổng hợp axit clavulanic ở vi khuẩn Streptomyces clavuligerus. Protein được mã hóa bởi gen orf6 cho thấy sự tương đồng về trình tự với enzyme ornithine acetyltransferase (OAT), một enzyme trong con đường sinh tổng hợp arginine. Nghiên cứu đã chứng minh rằng protein ORF6 có hoạt tính ornithine acetyltransferase, xúc tác cho quá trình chuyển nhóm acetyl từ N-acetylornithine sang glutamate để tạo thành ornithine và N-acetylglutamate. Ngoài ra, protein này được biểu hiện dưới dạng tiền chất protein, trải qua quá trình phân cắt tự động để tạo thành hai tiểu đơn vị alpha (α) và beta (β). Phân tích cấu trúc cho thấy ORF6 tồn tại dưới dạng dị tứ phân (α2β2). Nghiên cứu cũng thảo luận về vai trò tiềm năng của ORF6 trong việc tăng cường sự sẵn có của arginine cho quá trình sinh tổng hợp clavam, một yếu tố quan trọng cho sự sản xuất axit clavulanic.

Mục lục chi tiết:

• ORF6 from the clavulanic acid gene cluster of Streptomyces clavuligerus has ornithine acetyltransferase activity
• Biosynthetic pathway leading to clavulanic acid
• The role of OAT (ARGJ) in the biosynthesis of arginine
• Expression and purification of ORF6 in E. coli
• Gel filtration chromatography
• Enzyme assays
• Substrate selectivity of ORF6
• Role of ORF6 in clavulanic acid biosynthesis