Báo cáo Y học: Expression and characterization of recombinant vitamin K-dependent c-glutamyl carboxylase from an invertebrate, Conus textile

Expression and Characterization of Recombinant Vitamin K-Dependent γ-Glutamyl Carboxylase from an Invertebrate, Conus textile

Tác giả: Eva Czerwiec, Gail S. Begley, Mila Bronstein, Johan Stenflo, Kevin Taylor, Barbara C. Furie, and Bruce Furie

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này tập trung vào việc biểu hiện và đặc tính hóa enzyme γ-glutamyl carboxylase phụ thuộc vitamin K từ ốc biển Conus textile. Enzyme này đóng vai trò thiết yếu trong việc chuyển đổi acid glutamic thành acid γ-carboxyglutamic, một quá trình quan trọng trong sinh tổng hợp các protein liên quan đến đông máu và các protein khác. Các nhà nghiên cứu đã thành công trong việc biểu hiện enzyme tái tổ hợp trong cả hệ thống tế bào động vật có vú và côn trùng, chứng minh hoạt tính carboxylase và epoxidase phụ thuộc vitamin K. Nghiên cứu so sánh cấu trúc và chức năng của enzyme Conus với các enzyme tương tự ở động vật có xương sống, làm sáng tỏ sự bảo tồn tiến hóa và tầm quan trọng sinh học của quá trình tổng hợp acid γ-carboxyglutamic. Kết quả cũng cho thấy các điểm tương đồng và khác biệt về tương tác với các tiền chất protein, đặc biệt là vai trò của các vùng tiền chất trong việc định hướng và kích thích hoạt động của enzyme.

Mục lục chi tiết:

• Expression and characterization of recombinant vitamin K-dependent γ-glutamyl carboxylase from an invertebrate, Conus textile
• Keywords: blood coagulation; conotoxins; hemophilia; post-translational processing; vitamin K.
• EXPERIMENTAL METHODS
• Materials
• Chemical synthesis of carboxylase peptide substrates
• Preparation of cone snail venom duct homogenates, microsomal preparations and cell homogenates
• Enzyme assays
• Molecular cloning of C. textile vitamin K-dependent carboxylase
• Expression of vitamin K-dependent carboxylase cDNA
• Western-blot analysis of the recombinant Conus vitamin K-dependent carboxylase
• RESULTS
• Cloning of the vitamin K-dependent carboxylase cDNA
• Comparison of the primary structure of the Conus and vertebrate vitamin K-dependent carboxylases
• Expression of the Conus vitamin K-dependent carboxylase
• Molecular mass analysis of the recombinant Conus vitamin K-dependent carboxylase
• Specific carboxylase activity of the recombinant Conus carboxylase
• Enzymatic properties of the recombinant Conus carboxylase
• Effect of the propeptides of vitamin K-dependent protein precursors on Conus carboxylase activity
• Table 4. Epoxidase activity from recombinant Conus carboxylase.
• DISCUSSION
• ACKNOWLEDGEMENTS
• REFERENCES