Báo cáo khoa học: Relationships between structure, function and stability for pyridoxal 5¢-phosphate-dependent starch phosphorylase from Corynebacterium callunaeas revealed by reversible cofactor dissociation studies

Relationships Between Structure, Function, And Stability For Pyridoxal 5′-Phosphate-Dependent Starch Phosphorylase From Corynebacterium Callunae As Revealed By Reversible Cofactor Dissociation Studies

Tác giả: Richard Griessler, Barbara Psik, Alexandra Schwarz and Bernd Nidetzky

Lĩnh vực: Biotechnology and Biochemical Engineering

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá mối quan hệ giữa cấu trúc, chức năng và độ ổn định của enzyme starch phosphorylase từ Corynebacterium callunae (CcStP), một enzyme phụ thuộc vào pyridoxal 5′-phosphate (PLP). Thông qua các nghiên cứu về sự phân ly và tái tổ hợp có thể đảo ngược của cofactor, các nhà nghiên cứu đã làm sáng tỏ vai trò của PLP và các yếu tố khác trong việc duy trì hoạt tính và cấu trúc của enzyme. Các thí nghiệm với các dạng apo-enzyme (thiếu cofactor) và các dạng mutant đã cung cấp thông tin chi tiết về cách thức enzyme hình thành dimer và cách các anion như phosphate ảnh hưởng đến độ ổn định của nó. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng sự tương tác giữa các tiểu đơn vị là cần thiết để enzyme hoạt động hiệu quả và ổn định.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Preparation of apo-CcStP and apo-EcMalP
• Enzyme kinetic measurements
• Stability of apo-phosphorylase
• Structural characterization
• Results
• Preparation and characterization of apo-CcStP
• Reconstitutions with PLP of apo-CcStP and mutants thereof, and characterization of the wild-type holo-enzyme
• Effect of phosphate on recovered enzyme activity during reconstitution of apo-enzymes of wild-type CcStP and mutants thereof with 40 mm PLP
• Reconstitutions of apo-CcStP and apo-EcMalP next to each other in solution
• Production and characterization of PL-reconstituted CcStP
• Discussion
• Formation and characterization of apo-CcStP
• Reconstitution of the holo-enzyme
• Restoration of enzyme activity in PL-reconstituted phosphorylase by exogenous phosphate