Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu biểu hiện và tinh sạch kháng nguyên 56 Kda tái tổ hợp từ Orientia tsutsugamushi trong Escherichia coli

Nghiên cứu biểu hiện và tinh sạch kháng nguyên 56 kDa tái tổ hợp từ Orientia tsutsugamushi trong Escherichia coli

Tác giả: Trịnh Văn Toàn

Lĩnh vực: Sinh học thực nghiệm

Nội dung tài liệu:
Luận văn Thạc sĩ Khoa học này tập trung vào việc nghiên cứu biểu hiện và tinh sạch kháng nguyên 56 kDa tái tổ hợp từ Orientia tsutsugamushi, được thực hiện trong môi trường vi khuẩn Escherichia coli. Đề tài nhấn mạnh tầm quan trọng của kháng nguyên 56 kDa trong việc chẩn đoán bệnh sốt mò, một bệnh truyền nhiễm cấp tính có nguy cơ cao tại khu vực Châu Á – Thái Bình Dương. Nghiên cứu đề xuất quy trình tách dòng, biểu hiện và tinh chế kháng nguyên 56 kDa tái tổ hợp, nhằm tạo tiền đề cho việc sản xuất bộ kit ELISA chẩn đoán bệnh sốt mò hiệu quả và chính xác.

Mục lục chi tiết:

• Đặt vấn đề
• Chương 1: Tổng quan
  • 1.1. Bệnh sốt mò
    • 1.1.1. Tác nhân gây bệnh
    • 1.1.2. Đặc điểm lâm sàng bệnh sốt mò
    • 1.1.3. Đáp ứng miễn dịch của sốt mò
    • 1.1.4. Chẩn đoán bệnh sốt mò
    • 1.1.5. Điều trị
  • 1.2. Tình hình nghiên cứu bệnh sốt mò trên thế giới và Việt Nam
    • 1.2.1. Trên thế giới
    • 1.2.2. Tại Việt Nam
  • 1.3. Cơ sở nghiên cứu kháng nguyên 56 kDa tái tổ hợp
    • 1.3.1. Kháng nguyên màng 56 kDa
    • 1.3.2. Nghiên cứu tạo kháng nguyên 56 kDa tái tổ hợp trong chẩn đoán sốt mò
    • 1.3.3. Công nghệ protein tái tổ hợp
• Chương 2: Vật liệu và phương pháp
  • 2.1. Vật liệu
    • 2.1.1. Các chủng vi sinh vật và plasmid
    • 2.1.2. Hóa chất
    • 2.1.3. Máy móc và thiết bị
    • 2.1.4. Vật tư tiêu hao
  • 2.2. Phương pháp nghiên cứu
    • 2.2.1. Nhân gen mã hóa kháng nguyên 56 kDa bằng phương pháp PCR
    • 2.2.2. Điện di ADN trên gel agarose
    • 2.2.3. Tạo dòng tế bào biểu hiện mang gen mã hóa kháng nguyên 56 kDa
    • 2.2.4. Biểu hiện kháng nguyên 56 kDa tái tổ hợp trong tế bào E. coli Rosseta
    • 2.2.5. Điện di SDS – PAGE
    • 2.2.6. Thẩm tách miễn dịch Western blot
    • 2.2.7. Tinh sạch protein tái tổ hợp bằng sắc ký ái lực
    • 2.2.8. Thẩm tách loại muối
  • 2.3. Một số phần mềm sử dụng trong luận văn
• Chương 3: Kết quả và thảo luận
  • 3.1. Tách dòng và biểu hiện đoạn gen mã hoá kháng nguyên 56 kDa trong E. coli
    • 3.1.1. Khuếch đại các đoạn gen mã hoá kháng nguyên 56 kDa bằng phương pháp PCR
    • 3.1.2. Tạo dòng plasmid tái tổ hợp mang gen mã hóa kháng nguyên 56 kDa
    • 3.1.3. Biểu hiện gen mã hóa kháng nguyên 56 kDa trong vi khuẩn E. coli Rosseta
    • 3.1.4. Kiểm tra mức độ phản ứng của protein tái tổ hợp với mẫu huyết thanh bệnh nhân bằng kỹ thuật Western blot
  • 3.2. Lựa chọn một số điều kiện biểu hiện kháng nguyên 56 kDa
    • 3.2.1. Ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy cảm ứng
    • 3.2.2. Ảnh hưởng của nồng độ IPTG đến quá trình tổng hợp kháng nguyên 56 kDa
    • 3.2.3. Ảnh hưởng của thời gian thu mẫu đến sinh tổng hợp kháng nguyên 56 kDa
  • 3.3. Tinh sạch kháng nguyên 56 kDa
    • 3.3.1. Xử lý tiền tinh chế
    • 3.3.2. Kết quả tinh sạch kháng nguyên 56 kDa sắc ký ái lực
• Kết luận và kiến nghị
• Tài liệu tham khảo