Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 73 trang
Dung lượng: 15 MB

Giới thiệu nội dung

Phân Tích Tính Đa Hình Và Mức Độ Biểu Hiện Của Gen OsHKT1;5 Liên Quan Đến Khả Năng Chịu Mặn Ở Cây Lúa (Oryza Sativa)

Tác giả: Trần Xuân An

Lĩnh vực: Di truyền học

Nội dung tài liệu:

Luận văn thạc sĩ này tập trung nghiên cứu về gen OsHKT1;5 ở cây lúa (Oryza sativa), một gen được xác định có vai trò quan trọng trong việc cân bằng ion và khả năng chịu mặn của cây. Nghiên cứu này được thực hiện tại Việt Nam, một quốc gia có nhiều vùng đất bị ảnh hưởng bởi tình trạng nhiễm mặn, ảnh hưởng đến năng suất cây trồng, đặc biệt là lúa, một lương thực chủ yếu.

Mục tiêu chính của đề tài là phân tích tính đa hình của gen OsHKT1;5 trên các giống lúa có khả năng chịu mặn khác nhau, đồng thời đánh giá mức độ biểu hiện của gen này dưới điều kiện mặn. Các phương pháp nghiên cứu được áp dụng bao gồm kỹ thuật PCR, giải trình tự gen, phân tích tin sinh học và phương pháp Realtime-PCR để đánh giá mức độ biểu hiện gen.

Nghiên cứu này góp phần làm sáng tỏ vai trò của gen OsHKT1;5 trong cơ chế chịu mặn của cây lúa, cung cấp cơ sở khoa học cho việc chọn tạo các giống lúa có khả năng chống chịu tốt hơn với điều kiện môi trường bất lợi, đặc biệt là đất nhiễm mặn, nhằm đảm bảo an ninh lương thực quốc gia.

Mục lục chi tiết:

  • CHƯƠNG I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
    • 1.1. Đất nhiễm mặn và ảnh hưởng đến năng suất cây trồng
      • 1.1.1. Giới thiệu về đất nhiễm mặn
      • 1.1.2. Tình hình đất nhiễm mặn ở Việt Nam
      • 1.1.3. Ảnh hưởng của mặn tới năng suất, chất lượng cây lúa
    • 1.2. Cơ chế tác động của đất nhiễm mặn đến cây trồng
    • 1.3. Các họ protein vận chuyển ion Na⁺ ở cây trồng
      • 1.3.1. Vai trò của protein NHX và SOS trong việc duy trì nồng độ Na⁺ thấp trong tế bào chất
      • 1.3.2. Protein HKT đóng vai trò chính trong khả năng chịu mặn của thực vật và ngăn chặn Na⁺ vận chuyển từ rễ đến thân
    • 1.4. Họ gen OsHKT ở cây lúa
    • 1.5. Gen OsHKT1;5
    • 1.6. Nghiên cứu đa hình sử dụng phương pháp PCR kết hợp giải trình tự gen
      • 1.6.1. Kĩ thuật PCR
      • 1.6.2. Giải trình tự gen
      • 1.6.3. Phân tích tin sinh học
    • 1.7. Nghiên cứu biểu hiện của gen sử dụng phương pháp Realtime-PCR
  • 2.1. Đối tượng và vật liệu nghiên cứu
  • 2.2. Phương pháp phân tích đa hình gen
    • 2.2.1. Trồng và thu mẫu
    • 2.2.2. Tách chiết DNA tổng số
    • 2.2.3. Khuếch đại gen bằng PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệu
    • 2.2.4. Điện di trên gel Agarose
    • 2.2.5. Tinh sạch và giải trình tự gen
    • 2.2.6. Phân tích trình tự gen bằng các công cụ tin sinh
  • 2.3. Phương pháp phân tích mức độ biểu hiện gen
    • 2.3.1. Trồng lúa thủy cảnh và thu mẫu
    • 2.3.2. Tách chiết ARN tổng số
    • 2.3.3. Tổng hợp cDNA dùng mồi oligo T
    • 2.3.4. Phản ứng Realtime-PCR
  • CHƯƠNG III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
    • 3.1. Phân tích đa hình gen OsHKT1.5 ở các giống lúa
      • 3.1.1. Tách chiết DNA tổng số
      • 3.1.2. Phản ứng PCR nhân bản trình tự promoter và trình tự mã hóa của gen OsHKT1;5
        • 3.1.2.1. Thiết kế mồi
        • 3.1.2.2. Nhân vùng Promoter của gen OsHKT1.5
        • 3.1.2.3. Nhân vùng CDS của gen OsHKT1;5
      • 3.1.3. Phân tích đa hình vùng promoter của gen OsHKT1;5
    • 3.2. Đánh giá mức độ biểu hiện gen OsHKT1;5 đáp ứng điều kiện mặn
      • 3.2.1. Tách chiết RNA tổng số từ mô lá
      • 3.2.2. Thiết kế và kiểm tra độ đặc hiệu của mồi
      • Realtime-Actin
      • 3.2.3. Phân tích mức độ biểu hiện của gen OsHKT1;5 bằng phương pháp Realtime PCR
  • KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
    • Kết luận
    • Kiến nghị
  • TÀI LIỆU THAM KHẢO
  • Phụ lục 1. Kết quả phân tích các yếu tố cis trình tự promoter (-1500kb tính từ mã khởi đầu ATG) giống Nipponbare bằng công cụ PlantCARE