Destabilization of psychrotrophic RNase HI in a localized fashion as revealed by mutational and X-ray crystallographic analyses

Destabilization of psychrotrophic RNase HI in a localized fashion as revealed by mutational and X-ray crystallographic analyses

Tác giả: Muhammad S. Rohman, Takashi Tadokoro, Clement Angkawidjaja, Yumi Abe, Hiroyoshi Matsumura, Yuichi Koga, Kazufumi Takano và Shigenori Kanaya

Lĩnh vực: Khoa học Vật liệu và Khoa học Sự sống, Kỹ thuật, Đại học Osaka, Nhật Bản; Hóa học Ứng dụng, Kỹ thuật, Đại học Osaka, Nhật Bản; CREST, JST, Osaka, Nhật Bản.

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này tập trung vào việc làm sáng tỏ cơ chế mất ổn định của RNase HI từ vi khuẩn ưa lạnh *Shewanella oneidensis* MR-1. Thông qua các phân tích đột biến và cấu trúc tinh thể tia X, các nhà khoa học đã xác định được rằng sự mất ổn định này xảy ra theo cách cục bộ, với sự đóng góp độc lập của từng vị trí đột biến. Các đột biến thermostabilizing đã được giới thiệu vào protein, dẫn đến sự gia tăng đáng kể về độ ổn định nhiệt. Cấu trúc tinh thể của protein phức tạp sáu đột biến (6x-RNase HI) đã được xác định và so sánh với protein loại hoang dã. Kết quả cho thấy cấu trúc tổng thể của protein về cơ bản giống nhau, ngoại trừ các vị trí đột biến. Sự thay đổi trong các tương tác cục bộ tại các vị trí đột biến này, bao gồm việc giới thiệu các tương tác thuận lợi và loại bỏ các tương tác không thuận lợi, được cho là góp phần vào việc ổn định protein. Các đột biến này làm tăng số lượng các gốc axit amin kém thuận lợi cho độ ổn định protein theo cách cục bộ, dẫn đến sự mất ổn định tổng thể của RNase HI khi so sánh với các đối chứng ưa trung nhiệt và ưa nhiệt.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Kết quả
• Cấu trúc tổng thể của 6x-RNase HI
• Thảo luận
• Quy trình thực nghiệm
• Nuôi cấy và plasmid
• Đột biến
• Hoạt tính enzyme
• Phổ CD
• Biến tính nhiệt
• Biến tính do Urê
• Kết tinh và thu thập dữ liệu
• Xác định và tinh chỉnh cấu trúc
• Số truy cập PDB
• Lời cảm ơn
• Tài liệu tham khảo